继我们讨论的滚瓶问题之后，本期我们将开始探讨关于细胞培养箱的操作问题。
细胞的整个生命周期几乎都是在培养箱中度过。理想情况下，培养箱能够提供固定参数的温度、湿度和气体环境，为细胞生长提供持续而稳定的保障。然而现实情况中，培养箱内环境并非持续不变，可能出现微小差异。如果这些差异未被及时识别和消除，也会对细胞生长带来负面作用。
接下来，我们将逐一讨论培养箱各个参数对细胞培养的影响以及可以改进的方法。
01.温度因素
如果培养箱绝热性能差或门被持续打开，内部温度会下降。一般情况下，只有当培养皿或培养瓶中出现水蒸气凝集时，操作者才会注意到上述问题。如果温度下降，靠近门的培养容器中细胞生长速率变慢，甚至可能因水蒸气凝集出现真菌污染。
可以改进的方案为：对所有重要的实验均使用单独的细胞培养箱，减少培养皿或培养瓶取放的几率，使温度波动最小化。如果没有足够多的培养箱，可将关键细胞放在温度波动最小的区域内培养，比如培养箱最里面的位置。
细胞培养箱中温度细小变化造成的影响很难直接表现出来，不太容易被识别。图1展现的是WI-38细胞一种独特的生长形式，这种生长形式就是由培养皿中较小的温度波动引起的。实验人员将细胞接种于培养皿，并放置在培养箱内有孔洞的金属架上，在细胞培养容器被放置入培养箱的最初几个小时内，频繁打开培养箱，培养48个小时之后进行固定和染色，发现细胞形成了网格状的生长形式。这是由于金属支架比支架孔洞位置温度稍高，细胞更倾向于在温度高的区域生长。
图1.人类成纤维细胞WI-38网格状生长，差异形式与细胞培养中培养架上的孔洞相匹配
将细胞培养皿/培养瓶堆垛起来，也会造成培养皿或培养瓶之间的差异。堆垛最下方的培养皿/培养瓶与金属支架直接接触，升温或降温速率最快。堆垛中间位置相对不易受到温度波动的影响。当进行需要评估细胞生长速率的实验时，应该考虑到这些潜在的因素。建议：使用间隔装置或者空的培养容器来避开与金属支架的直接接触，平放，不堆垛。