CCK-8试剂盒简介
CellCountingKit简称CCK-8试剂盒，是一种基于WST-8（化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯)-3-(4-硝苯基)-5-(2,4-二磺基苯)-2H-四唑单钠盐）的广泛用于细胞增殖和细胞*性的快速高灵敏度检测试剂盒。WST-8在电子耦合试剂存在的情况下可以被线粒体内的脱氢酶还原成高度水溶性的*色甲臜产物。颜色的深浅与细胞的增殖成正比，与细胞*性成反比。使用酶标仪在nm波长处测定OD值，间接反映活细胞数量。CCK-8目前已广泛应用于高通量药物筛选，细胞增殖测定、细胞*性测定、肿瘤药敏试验以及生物因子的活性检测等。
基本操作方法
1.使用96孔板，每孔加入-μL培养基，含0-0个细胞，该细胞数目需根据细胞的大小、细胞增殖速度的快慢等因素决定。接种的孔数根据具体实验要求设定。
2.为了降低边缘效应对孔内细胞的不良影响，则实验孔周边各孔，用μLPBS补足，并放置于培养箱中培养至所需的天数。
3.实验前将CCK-8取至室温平衡溶解，再按照CCK-8溶液：培养基=1:10的比例，配制适量的含CCK-8的完全培养基。此过程需避光，配制后的培养基也需避光放置及添加。
4.弃掉96孔板内各孔的上清，对照组加入PBS，实验组避光加入-μL含CCK-8的完全培养基，放置于培养箱中孵育。
注：为保证各孔内CCK-8溶液和培养基比例一致，则先混合二者再统一添加。如果不考虑各孔之间的误差，或者为了实验操作的便利性（如对石蜡封闭的细胞进行活力测定），则根据孔内培养基体积推算需加CCK-8的量，直接吸取CCK-8溶液向孔内添加。
5.孵育2h后（时间的长短根据细胞的类型和细胞的密度等情况而定），无须任何处理，避光条件下，尽快将96孔板上机处理。
6.将96孔板置于酶标仪内测定OD值。波长设置为nm，获得数据结果后，导出Excel表用于后续分析。
7.移去96孔板内的混合溶液，并再清水冲洗后，丢弃处理。
不同应用场景的操作方法
1.细胞生长曲线：生长曲线测定天数为1-7天，按照天数准备96孔板个数，每天消耗一块板。每板上每组的复孔数，接种的细胞个数，使用的培养基及体积，加入的CCK-8溶液量及其作用时长均要保持一致。
2.药物、因子、培养体系对细胞生长的促进/抑制作用：为了保证各板各组细胞的一致性，最好先统一接种细胞后，第二天再更换成特殊的培养体系。接种时额外备一份经过同样处理的对照板，用于第二天的OD值测定，以确定起始的数据量。更换特殊培养体系后，可根据实验方案在特定的时间选取样品板进行CCK-8检测，结合起始OD值数据一并分析。
按数量梯度接种的细胞经CCK-8染色后效果展示
传统的细胞活力检测方法：MTT法
MTT法又称MTT比色法，是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在或nm波长处测定其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。该方法已广泛用于一些生物活性因子的活性检测、大规模的抗肿瘤药物筛选、细胞*性试验以及肿瘤放射敏感性测定等。
MTT法与CCK-8法的操作差异
1.由于CCK-8的水溶性，作用完成后不需要使用DMSO溶解，可直接上机测定；而MTT法则需移除上清，每孔加入μLDMSO溶解孔底水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒
2.CCK-8一般作用时长更短，通常为2-3h，MTT为4h
3.酶标仪使用的波长不同，CCK-8在nm波长处测定OD值，MTT因仪器参数所限，通常在实际操作中使用nm波长处测定OD值
4.CCK-8对细胞*性更小，相对来说也更加安全
作者：海星生物