细胞

首页 » 常识 » 预防 » 16Srdna菌种鉴定
TUhjnbcbe - 2022/10/8 0:10:00
白癜风慈善爱心月 http://nb.ifeng.com/a/20180507/6557031_0.shtml

一、为什么选择16Srdna进行菌种鉴定:

细菌的rRNA是细胞内含量最多的RNA,约占RNA总量的80%以上,由高度保守区和可变区组成。

细菌的rRNA包括5S、16S、23S,其中5SrRNA信息量少,不适合分析。23SrRNA尽管分子大,信息量多,但碱基突变速度较快,同样不适用于细菌鉴定。16SrDNA是编码原核生物核糖体小亚基rRNA(16SrRNA)的DNA序列,相比之下遗传较为稳定,长度在bp左右,代表信息量适中,可以用于研究系统进化。目前已经报道了10,种以上的细菌16SrDNA序列。

二、16Srdna菌种鉴定详细实验流程:

1.PCR扩增模板获取:

a.菌落热裂解液:挑去取单个菌落到无菌水中,沸水中孵育10min;涡旋震荡后短暂离心取1ul作为PCR模板(方便快捷,但产物不纯)

b.用常规的基因组DNA提取试剂盒提取细菌基因组DNA(可以获得高质量的DNA模板)

2.PCR扩增(具体体系及程序根据用的PCRmix而定)及一代测序,所用引物如下:

27F:AGAGTTTGATCCTGGCTCAG

R:GGTTACCTTGTTACGACTT

3.一代测序序列与数据库比对,确定细菌种属:

网站:

1
查看完整版本: 16Srdna菌种鉴定