北京哪家医院治疗白癜风效果最好 http://m.39.net/pf/a_4503291.html用这种方法可重复制备数微克的酵母DNA，得到的酵母DNA能被限制性内切核酸酶有效切割，也可用作PCR的模板。注意，酵母菌落能直接用于PCR，无需纯化酵母DNA。
在方案6步骤9~12中，介绍了一种与菌落PCR类似的方法。在第1章方案17中提供了另一种制备酵母DNA的方法。
用10mLYPD培养基培养酵母。将酵母培养物在30C、中度振荡条件下培养过夜。
2.转移5mL细胞到离心管中。g(SorvallSS-34转子，r/min)离心5min,收集细胞。将多余的培养物放到4C保存。
3.用0.5mL山梨糖醇缓冲液重悬细胞。将细胞悬液转移到一个微量离心管中。
4.加入20μL酵母溶细胞酶T的溶液(用山梨糖醇缓冲液配成2.5mg/mL浓度)。将细胞悬液在37C温育lh.
5.用微型离心机离心1lmin,收集细胞，吸出上清液。
6.用0.5mL酵母重悬缓冲液重悬细胞。
7.加入50μL10%的SDS.盖上管盖，快速颠倒离心管数次混匀。将离心管65C温育30min。
8.加入0.2mL5mol/L的乙酸钾，冰上放置管子lh。分离DNA
9.在微型离心机中，以最大转速4C离心5min，使细胞碎片沉积。
10.室温下用宽孔吸头转移上清到一个新的微量离心管中。
11.加入等体积室温的异丙醇，沉淀核酸。将管内容物混匀，室温放置5min。
▲不要使沉淀反应超过5min.
12.在微型离心机中以最大转速离心10s回收沉淀的核酸。吸出上清液，沉淀在空气中干燥10min。
