全国白癜风 https://yyk.familydoctor.com.cn/2831/schedule/原代细胞培养成功以后，要进行分离培养。细胞由原培养瓶内稀释后传到新的培养瓶中培养的过程，称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增形成细胞株，这样做的最大好处在于提供了大量持久的实验材料。
（一）操作步骤
1.吸液 吸掉培养瓶中旧的培养液。
2.消化 向瓶内加入胰蛋白酶和EDTA混合液少量，以能覆盖培养瓶底为宜。室温（25℃）下进行消化，2～5分钟后将培养瓶放到倒置显微镜下观察，发现细胞间质回缩、细胞间隙增大后即可终止消化。
3.终止 吸出消化液，向瓶内加入Hanks液少量，轻轻转动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅使用胰蛋白酶消化，可直接加入少量含血清的培养液终止消化。
4.吹打 吸取培养液，按顺序反复冲洗瓶壁细胞，形成细胞悬液。吹打动作要轻，以防用力过猛损伤细胞。
5.计数 用细胞板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置CO2培养箱中培养。
6.换液 细胞培养液的更换要根据细胞生长状态和实验要求来确定。一般2～3天后更换一次生长液。待细胞铺满瓶底即可使用或换成维持液。
（二）注意事项
1.掌握好消化时间，消化时间过短，细胞不易从瓶壁脱落，过长会导致细胞脱落损伤。
2.掌握好消化液浓度，当消化液浓度过高时，消化时间应缩短，过低时消化时间应相应延长。
