北京治皮肤科的好医院 http://pf.39.net/bdfyy/bdfzd/150714/4655748.html基因编辑是一种对基因组特定位点进行修饰的基因工程技术,迄今为止基因编辑技术已经在动植物和微生物的基因组研究中得到了广泛的应用。
主流的基因编辑工具有ZFNs、TALENs和CRISPR/CAS9。ZFNs和TALENs虽然在基因编辑的发展中扮演了重要的角色,但是由于效率不高,设计复杂,操作困难,价格昂贵所以它们的应用受到了限制,CRISPR/CAS9系统的出现很大程度上弥补了前面两种基因编辑工具的缺陷。
CRISPR(ClusteredRegularlyInterspacedShortPalindromicRepeat)/CAS9:由两个组成部分,第一部分为一个匹配目标基因的向导RNA,它可以引导Cas9蛋白到目标DNA区域;第二部分为Cas9(CRISPR-associatedprotein9)核酸内切酶,它可以引起靶位点的双链DNA断裂。CRISPR系统在被《科学》杂志列为年度十大科技进展之一,它有着简单,可靠,经济,高效的优点,它的出现使基因编辑进入了*金时代。
随着基因编辑工具的不断进步,基因编辑细胞系已经成为许多科研项目的必备材料之一,生物化学与细胞生物学研究所苏州研究院成立了基因编辑团队旨在为广大科研人员提供高品质的基因编辑细胞系和基因编辑服务,我们目前推出了“单细胞基因编辑服务”、“高通量基因编辑服务”,“CAS9过表达稳转细胞株服务”和“基因编辑一站式服务”,详情如下:
单细胞基因编辑服务
基因敲除
CRISPR/CAS9系统可以在特定位点切割DNA引起双链断裂,在没有同源模板的情况下细胞启动非同源末端连接(NHEJ)修复途径,这种修复途径会在切割位点造成没有规律的碱基插入或者缺失(indel),因此我们常在靠基因5’端外显子上设计sgRNA,利用NHEJ修复途径在DNA水平引入indel,这样就有可能造成转录水平的移码突变从而使目的基因失活,达到基因敲除的目的。
服务流程图如下:
基因定点敲入和点突变
CRISPR/CAS9系统可以在特定位点切割DNA引起双链断裂,在有同源模板的情况下细胞会启动同源重组(HDR)修复途径来修复受损伤的DNA,这种修复途径会在切割位点按照模板来精准的修复DNA,位点特异性点突变和位点特异性基因敲入也由此变的容易实现。
服务流程图如下:
高通量基因编辑
CRISPR/CAS9高通量基因编辑技术可以同时对成千上万个基因进行激活、敲低或者敲除,帮助科研人员快速准确的找到与感兴趣表型相关的基因。目前该技术已经在探寻药物作用机制、开发联合用药组合、发现新的药物靶点以及研究耐药机制等领域得到了广泛的应用。
服务流程图如下:
CAS9过表达稳转细胞株服务
CAS9蛋白是一个由个氨基酸组成的核酸内切酶,如果将它和sgRNA表达原件同时转入细胞,无论对载体的构建,病*包装还是细胞转染都会造成较大的困难,所以在转染sgRNA表达元件前构建CAS9的稳转细胞系可以有效的减小实验的难度。我们针对常用的细胞构建了CAS9稳转细胞株,详情见