过氧化物酶(POD)活性检测试剂盒（可见分光光度法）
注意：正式测定前务必取2-3个预期差异较大的样本做预测定。
产品货号：BA
产品规格：50管/48样
产品简介：
POD（EC1.11.1.7）广泛存在于动物、植物、微生物和培养细胞中，可催化过氧化氢氧化酚类和胺类化合物，具有消除过氧化氢和酚类、胺类*性的双重作用。POD催化H2O2氧化特定底物，在nm有特征光吸收。
产品内容：
提取液：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂一：液体60mL×1瓶，4℃保存；
试剂二：液体0.33mL×2瓶，4℃保存；用时每瓶加入5mL试剂一；用不完的试剂4℃保存一周；
试剂三：液体10mL×1瓶，4℃保存。
需自备的仪器和用品：
可见分光光度计、台式离心机、可调式移液器、1mL玻璃比色皿、研钵、冰和蒸馏水。
操作步骤：
一、粗酶液提取：
1、细菌、细胞或组织样品的制备：
细菌或培养细胞：先收集细菌或细胞到离心管内，离心后弃上清；按照细菌或细胞数量（个）：提取液体积（mL）为~：1的比例（建议万细菌或细胞加入1mL提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率20％或W，超声3s，间隔10s，重复30次）；g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
组织：按照组织质量（g）：提取液体积(mL)为1：5~10的比例（建议称取约0.1g组织，加入1mL提取液），进行冰浴匀浆。g4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、血清（浆）样品：直接检测。
二、测定步骤：
1、分光光度计预热30min以上，调节波长至nm，蒸馏水调零。
2、测定前将试剂一、二和三37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min。
3、样本测定表
在1mL玻璃比色皿中按顺序加入上述试剂，立即混匀并计时，记录nm下30s时的吸光值A1和1min30s后的吸光值A2。计算ΔA＝A2-A1。
三、POD活性计算：
1、血清（浆）POD活性
单位定义：每mL血清（浆）在每mL反应体系中每分钟A变化0.01为一个酶活力单位。
计算公式：POD（U/mL）=ΔA×V反总÷V样÷0.01÷T=×ΔA
2、组织、细菌或细胞POD活性
(1)按样本蛋白浓度计算
单位定义：每mg组织蛋白在每mL反应体系中每分钟A变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/mgprot）＝ΔA×V反总÷（V样×Cpr）÷0.01÷T=×ΔA÷Cpr
(2)按样本鲜重计算
单位定义：每g组织在每mL反应体系中每分钟A变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/g鲜重）＝ΔA×V反总÷(W×V样÷V样总)÷0.01÷T=×ΔA÷W
(3)按细菌或细胞数量计算
单位定义：每1万个细菌或细胞在每mL反应体系中每分钟A变化0.01为一个酶活力单位。
POD（U/cell）＝ΔA×V反总÷(×V样÷V样总)÷0.01÷T=14.27×ΔA
V反总：反应体系总体积，1.07mL；V样：加入样本体积，0.mL；V样总：加入提取液体积，1mL；T：反应时间，1min；Cpr：样本蛋白质浓度，mg/mL；W：样本鲜重，g；：细菌或细胞总数，万。
注意事项：
1、若一次性测定样本较多，可将试剂一、二、三和蒸馏水按比例配成混合液，在37℃（哺乳动物）或25℃（其它物种）放置10min以上，测定时加入15L样本和L混合液测定。
2、如果ΔA小于0.，可将反应时间延长到5min。如果ΔA大于0.5，可将样本用提取液稀释后测定，计算公式中乘以相应稀释倍数。
