1.实验原理
不同T细胞亚群表面抗原不同,通过加入不同的抗体可以区分T细胞亚群,且可以计算其所占比例。通过绝对计数微球可以准确计算各亚群的细胞数,与标准范围比较可以得出免疫力综合评分。
2.样本形式:人、小鼠、大鼠新鲜EDTA抗凝全血;人、小鼠、大鼠新鲜组织制备成的单细胞悬液需悬浮在含10%FBS的培养基内且要保持4℃环境。
3.样本量:人、小鼠、大鼠新鲜EDTA抗凝全血1ml左右;人、小鼠、大鼠新鲜组织、新鲜组织制备成的单细胞悬液需保证细胞数在5×以上。
4.实验步骤
(1)将组织用眼科剪剪碎,放入含10ml培养基(10%FBS,1%P/S,1mMEDTA)的15ml离心管中,37℃,rpm剧烈震荡孵育1h。
(2)将消化液经目尼龙网过滤后,g,5min离心,弃上清。
(3)细胞沉淀用PBS洗涤一次g,5min离心。
(4)将每样本的细胞沉淀平均分到3个流式管内,按下表加入相应抗体,涡旋混匀,室温避光染色15min。
5.免疫细胞分型方案以及结果案例