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一、无病毒苗培育法
使用无病毒疫苗是预防草莓病毒病的主要措施。它的植物生长潜力很强,单产可以提高20%-30%。因此,使用无毒幼苗是未来草莓生产的主要趋势。一些发达国家普遍采用了无病毒的幼苗,而中国已经开始在某些地区使用它们。现将无病毒幼苗的栽培方法介绍如下:
1.茎尖组织培养法
茎尖组织培养方法也称为体外培养方法。植物的茎尖分生组织不含病毒。通过芽尖培养诱导新植物成为栽培草莓无毒幼苗的常规方法。在组织培养的情况下,有必要长时间保持无蓝的状态,因为在组织培养的条件下,细真菌和真菌可以在短时间内繁殖,而组织的生长或植物的细胞需要很长时间,植物的组织容易受到细菌和真菌的攻击。因此,组织培养应在无菌条件下进行,这是成功的关键。
(1)组织培养繁殖草莓的优点
a.植株健壮
整个过程在无菌环境中进行,所有芽均来自无病毒的茎尖分生组织。因此,栽培的幼苗有毒或无毒,并且比常规方法生长更强,并且均匀且高收率。
b.繁殖速度快
一年内,一个分生组织可以获得数千甚至10,个具有巨大发展潜力的幼苗。
c.使用灵活
组织培养不受季节限制。只要建立组织培养操作车间,就可以全年生产。同时,这些植物可以冷藏保存,并在春季或秋季重新种植。并且该组织培养方法具有较少的繁殖土地并且可以节省土地。
d.有利于更新品种
草莓品种更新非常快,根据市场需求,可以每2-3年更新一次茎尖组织培养和繁殖。正常生产需要4到5年。
(2)茎尖组织培养的操作技术
a.制备培养基
像土壤一样,培养基是植物组织或细胞在培养过程中存活的基础。培养基的组成应基于草莓组织培养过程所需的营养。在草莓芽尖培养过程中,常用的基本培养基是MS培养基和White培养基。当MS培养基用作基本培养基时,需要BA0.25mg/L和GA0.25mg/L。当使用白色培养基作为基本培养基时,添加0.1ppm的NAA或5%的椰奶。这些微量物质促进了茎尖组织的分裂和生长,并形成了大量的生长点。
b.取材与接种
草莓的茎尖培养应利用匍匐茎尖端的生长点。考虑到茎的生长以及幼苗的繁殖和病毒鉴定,生长点的接种期被认为是一年中的6-8个月最佳。如果母本植物在温室中生长,则可以全年对其进行接种。材料达到实验温度后,首先用自来水冲洗2小时或更长时间,然后进行表面消毒。灭菌步骤是:首先用70%酒精冲洗1分钟,然后用0.1%-0.2%汞浸泡5-7分钟,然后转移到超干净的工作台上进行接种。也可以用70%的酒精冲洗半分钟,然后用0.1%的氯苯那敏灭菌15分钟,然后将其浸入1%过乙酸中2-5分钟,然后转移到干净的工作台中进行接种。
接种时,芽尖的尺寸应尽可能小。当生长点为0.2mm时,分化植物的无病毒率可以达到%,但是接种时操作困难,成活率低。相反,材料太大,例如大于1mm,存活率较高,但是病毒去除效果较低。已经证明,优选具有叶原基的生长点,其长度为0.3-0.5mm。应当在无菌条件下严格控制接种。消毒后的材料应用无菌蒸馏水冲洗3次。在解剖显微镜下接种,首先剥下幼叶和鳞片,暴露出芽尖的生长点,然后使用解剖针去除手部培养基上的生长点,每个培养瓶可以长出5-7个芽尖。
c.培养
接种草莓的茎尖后,将烧瓶放在培养室的培养架上。必须在培养室内保持芽尖生长的最佳条件。温度通常保持在22-25°C,照射时间为18小时,光强度为3勒克斯。1-2个月后,可以直接分化幼苗,培养1-2个月后可以铺开4-5片叶子。分化率的大小受许多因素影响。如果材料较小,则分化速率较低,分化速度较慢,但获得健康幼苗的可能性更大。例如,由于足够的内源激素和养分,整个茎尖的生长,在接种后分化出苗并且浓密。休眠或冷藏草莓茎上的芽内部污染比例较高。侧茎上新近出现的未触及的芽污染较少,接种后分化率较高,可获得更健壮的植物。
d.扩大繁殖
为了扩大繁殖系数,通常必须对再生的芽进行继代培养,即,将上述分化的新芽转移到新的培养基中。在培养基中应增加6-#-基氨基嘌呤的浓度,这可以减轻对腋芽的相关抑制并促进营养生长。另外,添加少量赤霉素使芽增殖并快速生长。在3-4周内,获得了由30-40个芽形成的芽,其中一些已经与新茎一起繁殖,并有几片正常的叶子。从瓶中取出具有两片或多片正常叶子的新茎,将其生根在瓶外,然后将剩余的小芽转移并传代培养。
e.生根
生根诱导可以在培养基上进行,也可以在瓶外生根。除去繁殖培养基中的6-苯甲基氨基票是生根培养筛选,并且可以获得发根幼苗。但是,为了获得整齐而结实的发根苗,应将其转移到特殊的生根培养基中,其特征在于吲哚丁酸浓度(0.5-1.0mg/L)增加,然后加入一些碳以疏松培养基。通常,将无根幼苗在培养基中培养2-4周,即完成生根,然后进行移植。在生根培养中,可将烧瓶放在室内自然散射光下。
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