北京治疗白癜风有哪些方法 http://www.csjkc.com/m/CellCulture
什么是细胞传代?
细胞传代培养(subculture),当原代培养成功以后,随着培养时间的延长和细胞不断分裂,一则细胞之间相互接触而发生接触性抑制,生长速度减慢甚至停止;另一方面也会因营养物不足和代谢物积累而不利于生长或发生中毒。
将培养物分割成小的部分,重新接种到另外的培养器皿(瓶)内,再进行培养的过程被称之为细胞传代培养。对单层培养而言,80%汇合或刚汇合的细胞是较理想的传代阶段。
Vol.1
耗材准备
在实验开始前,需要把实验用品准备齐全。
酒精、预热好的完全培养基、PBS缓冲液、胰酶、培养瓶或培养皿、移液器、移液管、离心管等
实验用的超净工作台需提前半小时照射紫外线。
Vol.2
实验操作
以贴壁细胞培养为例
1、穿好细胞房专用的实验服,戴好灭菌手套和口罩。
2、从培养箱中取出细胞培养瓶或培养皿(Tip1:一般选择处于对数期的细胞),用75%酒精消毒外包装后转移至到超净台中。
3、打开盖子(Tip2:如果是培养皿,只需打开一个缝隙即可,避免污染),轻轻吸出旧的培养液,加入适量PBS缓冲液洗涤1-2次(Tip3:注意从未培养细胞的侧壁加入,以免冲掉细胞),弃去PBS缓冲液。
4、用移液器加入适量胰酶(Tip4:具体量根据实验需要确定,提前将胰酶37℃预热,效果更好),盖好盖子,“十字”晃动,使胰酶充分接触细胞。
5、将加入胰酶的细胞培养瓶转移到倒置显微镜载物台,镜下观察细胞消化情况,当细胞变圆且大量脱落时,准备终止消化(Tip5:若初始的细胞密度比较高,加入胰酶后,肉眼也可观察到细胞脱落,当细胞有一半左右脱落时,即可终止消化,避免反复将培养皿拿出超净台,避免增加污染的风险),用75%的酒精喷洒培养瓶表面,转移到超净台。
6、用移液器加入等量含血清培养基,终止消化。移液器充分且柔和地吹打,避免产生气泡,使细胞完全脱落。
7、将培养瓶或培养皿中混合液体转移至离心管中(离心管规格根据实验需要确定),配平后离心3-5分钟左右(离心机转速根据细胞种类而定,常见的有-rpm/min)。
8、离心好后,用酒精喷壶喷洒离心管表面,转移进超净台,打开盖子,将上清液倒入废液缸。
9、加入适量体积含血清培养基,用移液器或巴氏吸管轻轻吹打,制成细胞悬液。
10、将细胞悬液分装进2个(或多个)洁净灭菌培养瓶或培养皿中,加入适量培养基,盖好盖子。
11、将分装好的培养瓶置于倒置显微镜载物台,观察细胞情况,细胞应保证一定数量,数量太少会影响生长情况。
12、在培养瓶上做标记,注明传代时间,细胞种类,操作人员等信息。在放入培养箱之前应再次用酒精喷一喷培养瓶表面,然后应记得整理操作台,用75%酒精擦拭超净台台面,清理废液和垃圾。
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