流程：
1：抗体验证
2：免疫沉淀
3：蛋白纯化
4：WB验证/质谱分析
一实验方法
1.1细胞裂解液的获取
1、将细胞培养至状态良好，吸除培养基，加5mlPBS，左右晃动，清洗细胞一次
2、加入1ml胰酶消化，消化完全后，加2ml完全培养基终止消化。
3、rpm，离心1min，去上清。
4、每1x个细胞加入l的RIPA裂解液。
5、每mlRIPA裂解液加10l的PMSF以及磷酸酶抑制剂和蛋白酶抑制剂，翻转裂解2h，0rpm离心15min，取上清，-20℃保存。
1.2免疫沉淀
1、取2个1.5mlEP管，每管加入ul总蛋白，再加入ulRIPAlysisbuffer，补齐ul，一管加入5ug目的抗体，一管加入5ugrabbitIgG，4℃旋转孵育过夜。
2、取2个1.5mlEP管，分别加入50ul的ProteinA/G免疫沉淀磁珠。
3、用1ml预冷的washbuffer清洗磁珠2次。
4、4℃，用ul3%BSA(PBS稀释）旋转封闭磁珠30min。
5、离心，吸除封闭液，将抗体-蛋白孵育物加入磁珠中，4℃旋转孵育4h。
6、离心，去上清，用预冷的washbuffer重悬沉淀，4℃旋转清洗10min；共洗3次。
7、离心，丢弃上清，加入5XSDS-PAGEloadingbuffer50l，95℃煮10min，后置于冰上。
8、4℃0rpm离心15min，取上清，可进行银染、WB等实验。-20℃保存。
1.3Western检测目的蛋白（操作步骤略）
1:检测蛋白是否在细胞中有表达
2：检测目的抗体是否有拉下目的蛋白
1.4蛋白银染-质谱（操作步骤略，根据对应银染试剂盒说明书使用即可）
二实验结果展示
2.1WB验证抗体表达质量
1：目的抗体可在目的细胞中正常表达
2：目的抗体可以把目的蛋白拉下，证明实验体系操作没问题。
2.2银染结果
银染结果显示目的组有差异蛋白拉出，方可进行后续的质谱分析
