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细胞学堂盘点细胞培养中容易忽视的五个致命 [复制链接]

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细胞生长状态受多种因素影响,在培养细胞时,我们知道温度不能过高也不能过低,有些细胞培养前还需要包被培养瓶,但实验过程中我们很容易忽略这些小因素,导致细胞负伤惨重。

这些小细节究竟如何影响的细胞状态?在培养时我们又该如何避免?本期细胞学堂普诺赛整理了影响细胞生长最常见的五类因素,助您完美避坑!

01

细胞生长附着物

贴壁细胞在正常情况下都会贴壁,但某些细胞本身贴壁不牢或贴壁性差,而包被附着物能够促进细胞的黏附,所以在培养一些特殊细胞时,需要对培养瓶/皿进行包被后使用。常用的基质有多聚赖氨酸(D型、L型)、明胶、胶原蛋白、细胞外基质混合物,培养时可根据需要自行选择。

小贴士

细胞贴壁差时可使用基质包被培养瓶/皿。

02

细胞之间的接触程度

正常细胞(二倍体)存在贴壁接触抑制,长满后细胞生长停止,而肿瘤细胞等非正常细胞,接触抑制作用较弱,可生长至较高的细胞密度,但某些细胞一旦长过,其损伤难以逆转,所以培养细胞时不建议细胞密度太高。

小贴士

无论什么细胞,都不能长满再传代,一般细胞汇合度达到70-80%即可传代。

03

培养基PH值

大多数细胞系在PH7.4左右时生长最好,而常规培养基的指示剂为酚红,所以多数情况下,我们所见的培养基都呈红色,但不同培养基的颜色会有差异,例如DMEM比颜色深一点。在培养细胞时,也可以根据培养基的颜色判断细胞状态,如随着细胞生长,pH值会变成黄色。

小贴士

培养时时刻

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