皮肤白癜风名家治疗 https://m.39.net/pf/a_6845117.html传代培养：原代细胞培养成功今后，需求进行分离培养，不然细胞会因生存空间不足或密度过大，营养障碍，影响细胞成长。细胞由原培养瓶内别离稀释后传到新的培养瓶中培养的进程称之为传代培养。传代细胞允许培养的细胞扩增(形成细胞株)，能够进行细胞克隆，易于保存，但或许损失一些特别的细胞和分化特征。传代细胞形成细胞株的最大利处在于提供了大量持久的试验材料，便于试验。
试验所需设备：
AlphaClean洁净工作台、倒置显微镜，HF二氧化碳培养箱、培育瓶、吸管、废液缸等
试验所需试剂：0.25％胰酶、培养基（含10％小牛血清）
试验所需细胞：贴壁细胞株
操作过程：
（1）入无菌室之前用肥皂洗手，用75％酒精擦拭消毒双手
（2）倒置显微镜下调查细胞形状，确定细胞是否需求传代（传代规范：1、把握好细胞是否健康的规范：健康细胞的形状丰满，折光性好，成长致密时即可传代。2、待细胞铺满瓶皿底面，即可运用。也可持续传代扩展培养或换成保持液。）及细胞需求稀释的倍数。将培养用液置37℃下预热.。
奥利巴斯倒置显微镜
（3）将AlphaClean洁净工作台用75%酒精或0.1％新洁尔灭溶液擦净
（4）翻开超净台的紫外灯照射台面30min左右，封闭超净台的紫外灯，翻开抽风机清洁空气，除掉臭氧，建议运用AlphaClean洁净工作台，它具有紫外灯预定功用，能够根据需求提前设定好需求消毒时刻段，自动运行，节约操作过程。
HealForceAlphaClean可预定紫外灯灭菌的洁净工作台
（5）运用红外灭菌器或点着酒精灯；取出无菌试管，巴士德吸管和刻度吸管；安上橡皮头；过酒精灯火焰略烧后插在无菌试管内。
（6）将培养用液瓶口用75％酒精消毒，过酒精灯火焰后斜置于酒精灯旁的架子上。
（7）吸掉或倒掉培养瓶内旧培养液。
（8）向瓶内参加胰蛋白酶液和EDTA混合液少数。以能掩盖培养瓶底为宜。
（9）置37℃孵箱或室温（25℃温度）下进行消化，2~5min后把培养瓶放在倒置显微镜下进行调查，当发现胞质回缩、细胞空隙增大后，应立即间断消化。
（10）吸出消化液，向瓶内参加Hanks液少数，悄悄滚动培养瓶，把残留消化液冲掉，然后再加培养液。如果仅运用胰蛋白酶消化，在吸除胰蛋白液后，可直接参加少数含血清的培育液，停止消化。
（11）运用弯头吸管，吸取瓶内培养液，按次序重复悄悄吹打瓶壁细胞，使之从瓶壁脱离形成细胞悬液。吹打时动作要轻柔，以防用力过猛损害细胞。
（12）用计数板计数后，分别接种于新的培养瓶中，置HFCO2培养箱或HF90CO2培养箱中进行培育。
HealForceHF二氧化碳培养箱
（13）细胞培养换液时刻应根据细胞成长的状态和试验要求来确定。一般2～3d后应换一次成长液。待细胞铺满器皿底面，即可运用；也可持续传代扩展培养或换成保持液。
操作注意事项
1、把握好细胞消化的时刻，消化时刻过短时，细胞不宜从瓶壁掉落，过长的消化会导致细胞掉落、损害；
2、把握好消化浓度，当消化液浓度过高时，消化时刻应缩短，过低时细胞消化时刻相对延伸。
