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干细胞扩增培养体系郑大中科博生 [复制链接]

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具中科博生研究表明,用于体外扩增造血细胞的培养体系通常分为基质支持的培养体系、无基质悬浮培养体系和持续灌注式生物反应器3类。

(1)基质支持的培养体系

这种体外模拟骨髓造血微环境的方法源于Dexter等()创建的长期骨髓的倍养技术。骨髓基质细胞是体内造血微环境的重要组成部分。它通过与造血细时密切接触、分泌细胞外基质和产生许多甚至至今未知的对造血有着无可取代作用的细胞因子来调节造血细胞的自我复制和增殖分化过程,两者之间复杂的相互依存和相互调控保证了体内造血过程的正常进行。中科博生。

同样,基质细胞及其产生的多种造血调控因子的存在,对体外扩增时造血细胞功能活性的维持同样具有重要的支持作用。加入成人或胎儿基质细胞的扩增体系,可使脐血中LTCIC的产率较

无基质者分别提高2~4倍,尤以胎儿基质细胞的扩增体系最佳,这可能与不同发育阶段的基质细胞分泌造血因子的种类和数量不同有关。在基质支持体外造血的研究中发现,原代培养的基质细胞层和基质细胞系均可发挥作用。然而,培养原代基质细胞繁琐耗时,加之恶性肿瘤患者经反复化疗和(或)肿瘤细胞骨髓浸润,自身基质已明显受损,支持造血细胞增殖的能力下降;而用体外培养的异基因基质细胞系支持干细胞扩增时,收获的造血细胞中又难以避免地混有异基因基质细胞而影响移植的成功。中科博生。

近来研究表明,在扩增体系中加入基质细胞系培养上清(SCM),以及与基质细胞密切接触在对造血干/祖细胞的扩增方面无明显差别,因而,SCM支持的造血干/祖细胞体外扩增是切实可行的。

(2)无基质悬浮培养体系

基质支持的培养体系原理是通过构成造血微环境中基质细胞分泌的细胞因子实现的。这启发人们直接将适当浓度的外源性重组造血生长因子加入含血清或无血清的液体培养基中培养扩增造血细胞的方法——无基质悬浮培养体系。该方法简便易行,既无需建立骨髓基质细胞层,又便于随时收集细胞,较适于临床应用扩增培养纯化的CD34细胞。但是,由于缺乏了与维持造血细胞自我复制能力密切相关的造血微环境的支持,可能会影响扩增的造血细胞维持永久植活的能力。中科博生。

(3)持续灌注式生物反应器

持续灌注式生物反应器是全封闭的动态培养自动化装置,从整体装置到整个操作过程都易于规范化处理,减少甚至避免了细胞污染的机会,并保证维持细胞因子、营养物质、代谢产物水平及其他培养条件的相对稳定,从而有利于各阶段造血细胞的有效扩增和扩增质量的控制。该方法适用于培养扩增骨髓或阶血单个核细胞,在培养过程中,单个核细胞中的各种辅助细胞可形成天然基质厚于维持或扩增早期造血祖细胞。中科博生。

研究表明,持续灌注式生物反应器培养比家养扩增的造血祖细胞和原始干细胞如LTCIC的产率大,其中形成的活动

区——鹅卵石区的数量多,面积大。因而,该体系更适用于造血绷胞扩临床应用。

中科博生期待大家一起探讨学习。

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