白癜风治疗 http://baidianfeng.39.net/a_zczz/190812/7375991.html好不容易完成一个重组蛋白的表达纯化，结果却内*素含量超标，这可该怎么办怎么办啊？
那么，内*素是什么东西呢？为何会影响重组蛋白的使用呢？
内*素（Endotoxin）是革兰氏阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。细菌在生活状态时不释放，只有当细菌死亡自溶或粘附在其他细胞时，才表现其*性，主要由多糖、脂质和蛋白质组成复合体。内*素直接作用于人体，激活组织内的炎性细胞和炎症因子，导致机体发热并引发全身性炎症反应，继而引起弥散性血管内凝血、休克、多脏器功能衰减等。
内*素会与细胞膜上的受体结合引起免疫反应，对细胞有较强的*性作用，从而影响体内或体外细胞的生长和功能。因此，在免疫学实验、细胞培养实验、细胞治疗、细胞凋亡研究以及干细胞培养与扩增分化中，使用到蛋白因子都需要低内*素。在细胞因子功能分析、蛋白相互作用等研究中也必须使用低内*素的重组蛋白。以重组蛋白作为抗原，生产高质量的抗体更是需要低内*素的重组蛋白。
内*素超标，会严重影响重组蛋白的使用，怎样操作才可以避免呢？
首先，在蛋白的表达纯化过程中要使用注射用水，尽量减少内*素的产生。在重组蛋白制备过程中，所有用到的缓冲液、液体试剂、培养基等均用注射用水配制，防止引入内*素。
制备注射级用水设备
其次，选择原核表达系统以外的平台，比如CHO稳定细胞株表达平台、HEK稳定细胞株表达平台、昆虫杆状病*表达平台及酵母细胞表达平台。内*素大多是原核细菌产生的，避免原核表达系统，可以减少重组蛋白产品的内*素含量。
低内*素表达系统
第三，高通量亲和纯化系统，本身就是一种去除内*素的理想方法。在蛋白纯化过程中，采用亲和层析过柱法，极大的降低了产品的内*素含量。
亲和层析纯化系统
第四，GMP生产线，整个制备过程无菌，使得重组蛋白的内*素含量低于低于0.01EU/ug。
低内*素GMP车间
如果制备的重组蛋白内*素超标了，还是有办法“拯救”的，可以选择超滤法或亲和层析去除。
内*素去除方法
当然最好的方法还是表达纯化的重组蛋白内*素含量合格，所以，如果有重组蛋白表达纯化需要时，要根据自己的后续实验需要，选择能制备低内*素产品的厂家。
大家在重组蛋白表达纯化过程中还遇到过什么难题呢？
欢迎大家在下方的讨论区和义翘神州一起探讨学习。
