惊了！细胞划痕实验还能如此简单！
现在都不用手动拍照观测了？
没错！
阿显手把手沉浸式教学
??别眨眼哦！??
一、实验前准备
实验开始前，将6孔板、离心管、黑色记号笔、直尺、吸管筒、移液枪、枪头等所需工具吸等放入无菌超净工作台，以紫外线照射30min。然后，通风机通风10min。
取出无菌6孔板，用黑色记号笔在6孔板底部，用直尺比着，均匀划横线，大约每隔0.5~1cm画一道，横穿过孔，每孔至少穿过3条线。
画好横线后，在板上分别做好标记。
二、实验过程
1、消化
取出健康细胞，吸掉原来的培养液，用无菌PBS清洗细胞。加入1ml胰酶消化液消化细胞，显微镜下观察所有细胞完全皱缩变圆后加入完全培养基终止消化。
2、离心
收集细胞悬液于离心管中，-rpm/min室温离心5min。用细胞计数仪进行计数或经验判断数量，接着弃去上清，加入培养基重悬细胞。
3、接种
以每孔约5×的细胞密度接种到6孔培养板上，补足培养基后在培养箱中培养。具体接种数量因细胞种类不同而有所区别，大约过夜能铺满。
4、划痕
培养到汇合度约80%时候，取出铺满6孔板的细胞，用20μL枪头垂直于孔板表面，垂直于背面的横线划痕，由孔一端划向另一端，枪头要垂直，不能倾斜。此时可在培养皿的表面清晰看到细胞表面呈#字形划痕。
每条黑线的上下缘与划痕交叉点作为观察点，这样一方面便于观察另一方面可以一次取多个观察点，最终可以获得多个数据。
5、PBS清洗细胞及培养
划痕完成后，吸掉旧培养基，用无菌PBS洗细胞表面3次，去除划下的细胞，使留下的间隙肉眼即清晰可见，然后更换新鲜无血清或低血清(2%)的培养基。轻轻摇动六孔板，使药物与细胞培养液充分混合，放入37度，5%C02培养箱中培养。
6、结果观察
在适当的时间点，如0，6，12，24小时后取出细胞，在显微镜下观察痕道宽度并拍照，然后导入到软件中进行结果分析，或者直接使用细胞实时监测仪自动完成拍摄照片、视频和结果分析。
三、注意事项
1、细胞密度
注意细胞生长状况，选择适当的细胞接种密度，对不同的细胞要观察其贴壁率等，保证培养终止时密度适当。
2、冲洗细胞
要缓慢轻柔，在用PBS缓冲液冲洗时，注意贴壁缓慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。为了避免细胞数量和状态受到影响，尽量不要用吸泵，可用移液枪缓慢吸走。
3、低浓度或无血清培养
划痕PBS冲洗后应该加入无血清培养基或者低浓度血清培养基，以排除细胞本身增殖对实验的影响。
你学会了吗？
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