白癜风治疗成功案例 http://www.jk100f.com/baidianfengzixun/baidianfenganli/5776.htmlLLC细胞是小鼠Lewis肺癌细胞，它是从C57BL小鼠的肺部建立的细胞系，该小鼠有由原发性Lewis肺癌植入引起的肿瘤。该细胞被广泛用作转移的模型，用于研究癌症化疗药物的机制，且具有高度致瘤性，但在小鼠中转移性较弱。
本期普诺赛将会为大家详细介绍LLC细胞的基础信息、传代和换液过程、及培养注意事项，对LLC细胞培养有疑问的同学一定要认真看哦！
01基础信息
●生长培养基：
DMEM+10%FBS+1%P/S
●生长特性：
半贴半悬，贴壁部分圆形和梭形并存
●推荐传代比例：
1:2-1:4，每2~4天传代一次
●推荐换液频率：
2~3次/周
●培养条件：
气相：空气，95%；CO2，5%
温度：37℃
●冻存条件：
55%基础培养基+40%FBS+5%DMSO
LLC细胞正常生长LLC细胞正常生长
02细胞传代
01用移液枪吸出培养液，再转移到无菌离心管中；
02贴壁部分加入2mL左右PBS，轻轻晃动培养瓶润洗细胞，再吸出PBS丢弃；
03加入1mL左右胰酶，轻轻晃动培养瓶使之浸润所有细胞，再放入培养箱静置消化；
04消化1~2min，显微镜下看到细胞明显收缩变圆。当侧立培养瓶细胞可以滑落时，则可终止消化，且全程不要拍打培养瓶；
05用3ml含血清的培养基终止消化，吹打细胞使之脱壁，并在液体里反复吹打，使细胞尽量呈单颗细胞的悬浮液，这时可以在显微镜下观察；
06将消化下来的细胞吹散后收集到第1步所提到的离心管中，按照rpm/min离心3min。离心完毕后弃掉上清，再加入新鲜培养基重悬，按实际情况分瓶，放入培养箱培养。
07检查培养箱二氧化碳，温度和水盘。
03细胞换液
■吸出旧培养基转入离心管，rpm/min离心3min；
■用新的培养基重悬细胞后，加入到原瓶中继续培养；
■每2~3天换液一次。
注意事项
细胞形态不均一，有圆形细胞也有梭形细胞；细胞生长过程中部分展开部分呈圆形贴壁；
细胞伸展开和贴壁比例的增加都需要等待48h以上；
使用高品质的胎牛血清更有利于细胞生长；
换液注意收集悬浮的细胞；
需要经常观察，最好是每天都在显微镜下进行观察，以确定细胞状态。
