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组织培养的设备和条件 [复制链接]

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组织培养的设备和条件

一、植物组织培养的条件

1、严格无菌植物组织培养的整个操作过程和培养过程都要求在严格无菌条件下进行,无菌是组织培养成功的首要条件。操作过程在接种室内超净工作台上进行;外植体材料要进行表面消*;配制的培养基要进行高压灭菌消*。

2、温度处理整个操作过程和培养过程都在恒温条件下进行,一般在27℃之间,热带植物可偏高些,脱*植物需高温处理。

3、光照处理植物器官的产生必须有光,某些植物器官的产生在无光条件下,但它的生长和发育必须有光。茎尖的生长及试管苗的继代增殖以光强度适宜;生根试管苗以宜。光质对愈伤组织诱导、增殖、器官的分化有不同的影响。光周期诱导一般是16h,黑暗是12h,对光周期敏感植物要掌握光照时间,否则影响植物的分化。

4、培养基的酸碱度培养基的酸碱度因植物的种类不同而异,大多数植物要求在5.8之间,喜酸性培养的植物要求酸碱度偏高。

二、培养基的成分及配制

1、培养基的成分用于植物组织培养的培养基,迄今不下几十种。归纳起来,任何一种培养基均有以下几部分组成:无机盐(大量元素、微量元素),有机化合物(蔗糖、维生素类、氨基酸、核酸及其他水解化合物),铁盐螯合剂,植物激素。植物激素对于组织培养的成功至关重要。接种的外植体的分化速度和分化方向—一长芽或长根,均取决于所加激素的种类、数量及比例。简而言之,主要是生长素类和细胞分裂素类的加入量以及两者的比例。一般生长素类包括吲哚乙酸、吲哚丁酸、萘乙酸;细胞分裂素类包括激动素、苄基氨基嘌呤、二甲基丙烯氨基嘌呤。培养基中的糖类主要是蔗糖,少数情况下使用葡萄糖。大批生产亦可使用食用糖。糖在培养基中的作用是提供碳源,同时用于维持渗透平衡,琼脂是固体培养基中的成分,作为固化剂支持培养物在培养基的成本消耗中,琼脂占有相当大的比例。培养基中琼脂的加入量一般为10g。

2、母液的制备组织培养用于生产实际中,有时培养基的用量相当大,需一批一批地连续配制。为简化配制过程,提高工作效率,将各种所需药品先配制成高浓度溶液,贮备起来。到配制培养基时,按要求的浓度取一定量稀释即可。我们称这些高浓度的溶液为贮备液,习惯上称母液。制备母液时,先将所有药品分成几组,每组药品制成一种母液。分组的原则是同组药品混合溶解时不会发生质的变化,也不产生沉淀。一般将药品分成5组:大量元素、微量元素、铁盐、有机化合物类和植物激素。其中植物激素母液有若干种,每种激素都先制成1mg/ml的溶液。母液制备过程中,有如下三点需要注意:

(1)药品称量要尽可能准确。大量元素用千分之一工业天平称取,而微量元素、有机物类、植物激素等,则必须使用千分之一的天平。

(2)母液配制完毕注入试剂瓶以后,一定要标明母液的名称、序号、浓度和配制日期等。

(3)配制好的母液应放置的冰箱内保存,尤其是有机物和激素类。生产中常用的培养基以培养基为主。现以培养基为例介绍培养基的成分组成和配方。

三、培养基的配制

1、将用于配制培养基的容器洗净,加入培养基总量四分之三的蒸馏水,放入所需的琼脂和糖,然后加热溶解。在加热过程中应注意不断地搅拌,以避免琼脂粘锅或溢出。

2、待琼脂和糖完全溶解后,按表中所列的顺序加入各贮备液以及所需的植物激素。

3、用蒸馏水定容补充由于加热蒸发所损失的体积。

4、用蒸馏水调整pH。

5、通过漏斗或下口杯将培养基注入三角瓶或试管内,注入量为瓶容积的三分之一。灌装动作要迅速,且尽可能避免培养基粘在瓶壁上。应在培养基未冷却前灌装完毕。

6、用棉塞或塑料封口将瓶口或试管口封严。

7、将封装好的三角瓶或试管码放在高压灭菌锅内。于Pa压力、℃下灭菌20分钟。如使用小型手提式灭菌锅时,一定要注意,加热后,当锅内压力上升时,先反复放气数次,将锅内空气排尽以后,再计算时间,否则,达不到高压灭菌的效果。

8、对于一些受热易于分解的物质,如维生素类,可采取先过滤灭菌的方法。待培养基灭菌后,尚未冷却之前(40℃左右),加入并摇匀。经过高压灭菌的培养基可在室温下存放5天,或在冰箱内存放10天左右。提倡尽可能在短时间内用完。

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