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细胞复苏具体操作步骤 [复制链接]

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细胞复苏是指将冻存在液氮里边或者-80℃冰箱中的细胞解冻,再培养传代。细胞复苏应采用快速融化的方法,这样的目的是为了让细胞外结晶在很短的时间内融化,从而避免慢悠悠的融化,使得水分渗入细胞内再结晶,从而对细胞再次造成伤害,从而影响细胞的存活率。细胞复苏的原则-快速融化:必须将冻存在-℃液氮中的细胞快速融化至37℃,使细胞外冻存时的冰晶迅速融化,避免冰晶缓慢融化时进入细胞形成再结晶,对细胞造成损害。

具体操作:

一.实验前准备:

1.将水浴锅预热至37℃

2.用75%酒精擦拭紫外线照射30min的超净工作台台面。

3.在超净工作台中按次序摆放好消过*的离心管、吸管、培养瓶等等。

二.取出冻存管:

1.根据细胞冻存记录按标签找到所需细胞的编号。

2.从液氮罐中取出细胞盒,取出所需的细胞,同时核对管外的编号。

三.迅速解冻:

1.迅速将冻存管投入到已经预热的水浴锅中迅速解冻,并要不断的摇动,使管中的液体迅速融化。

2.约1-2min后冻存管内液体完全溶解,取出用酒精棉球擦拭冻存管的外壁,再拿入超净台内。

四.平衡离心:

用架盘天平平衡后,放入离心机中r/min离心3min

五.制备细胞悬液:

1.吸弃上清液。

2.向离心管内加入10ml培养液,吹打制成细胞悬液。

六.细胞计数:

细胞浓度以5×/ml为宜。

七.培养细胞:

将复合细胞计数要求的细胞悬液分装入培养瓶内,将培养瓶放入37℃和5%CO2的培养箱内2-4小时(或者24-48小时)后换液继续培养培养,换液的时间由细胞情况而定。

温馨提示警惕易犯错误:

1.水浴锅未预热或者未预热到37℃。

2.水浴锅内冻存管太多,导致传热不佳,使融化时间延长。

3.离心前忘记平衡,导致离心机损坏和细胞丢失。

4.一次复苏细胞过多,忘记更换吸头和吸管,导致细胞交叉污染。

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