最近和朋友聊到流式细胞仪,很实用的技术!
流式细胞仪用于测量细胞特征,包括细胞大小、细胞数量、细胞周期等。可提供单个细胞的高度特异性信息。
要确保每个细胞都得到独立分析,实现高效有效的流式细胞分析最关键要求:样品为单细胞悬浮液。
流式细胞仪的三个主要系统是流体学、光学和电子学系统。
流体学系统负责将样品从样品管转移到流动池。一旦通过流动池(并通过激光束),样品将被分选出来(在细胞分选仪中)或移到废液中。光学系统的元件包括激发光源、透镜和滤光片以及用于产生光电流的检测系统。电子系统是对来自检测器的光电流经过数字化、处理和保存,以用于后续分析。
加样
样品为单细胞悬浮液中的荧光标记细胞,细胞悬浮在一种被称为鞘液的生理缓冲液。流体系统(管道、泵和阀)将初始样品悬浮液排列成单列细胞流(图2),并使细胞通过流式细胞仪以进行分析。
激光检测点
细胞与激光发生相互作用的地方称为激光检测点。当激光束照射到单个细胞时,光束同细胞内的物理结构相碰撞,导致光线散射。这种光散射可被测量,并且与相对细胞大小和细胞内的结构相关。根据采集光的位置相对于激光路径的角度不同,散射光分为前向角散射(FSC)和侧角散射(SSC),同时,激光器的光激发与细胞相关的所有荧光团,激发荧光。流式细胞仪检测器收集并处理所有这些光。通过激光检测点之后,流体系统会将不需要的细胞输送到废液桶。
应用
蛋白质表达-遍及所有细胞,包括细胞核内蛋白质转译后修饰-包括剪切和磷酸化蛋白质RNA-包括IncRNA、miRNA和mRNA转录物细胞健康状态-从存活率到晚期凋亡或程序化细胞死亡细胞周期状态-是评估细胞处于G0/G1期、S期、G2期或多倍体状态的强大工具,包括分析细胞凋亡和活化鉴定和表征异质样本中的不同细胞亚群-包括区分中枢效应记忆细胞和耗竭T细胞或调节性T细胞
接下来,分享一些流式细胞仪的流体学、光学、电学的设计及选型!