北京哪里有专业治疗白癜风的医院 https://disease.39.net/bjzkbdfyy/250619/n4vkqvl.html我国恶性肿瘤发病率多年呈上升趋势，开发安全高效的抗肿瘤药物成为恶性肿瘤治疗的关键。通过细胞表达及分离纯化，全自动高通量筛选，可加速药物研发进程。
肿瘤的主要特征是遗传不稳定性诱发的连续基因突变、持续性的血管生成、细胞生长失控并抵抗细胞死亡、组织浸润及转移及细胞能量代谢异常等。抗肿瘤药物以干扰或影响核酸生物合成、影响DNA结构与功能、干扰转录及阻止RNA合成、以实现对肿瘤细胞的杀伤。
凡知医疗全自动高通量体外细胞筛选CRO服务可加速识别最具潜力的药物成分，助推新药研发更快完成基于表型的药物筛选，服务范围包括细胞培养、细胞转染、高通量细胞筛选等，另配套十多种自研磁珠法提取试剂盒，保证RNA高得率高质量。
尤其是凡知医疗FG高通量细胞RNA提取试剂盒可以兼容Hela细胞、Huh7细胞、HepG2细胞、人源肝细胞等细胞系，以Huh7为例，使用凡知医疗FG高通量细胞RNA提取试剂盒，在96孔细胞板，密度%，50μL洗脱液的条件下，提取RNA得率为20-30ng/μL。
图1：凡知医疗FG高通量细胞RNA提取试剂盒
凡知医疗磁珠法提取试剂盒还普遍适用于市场上的主流全自动高通量核酸提取仪。若配套使用凡知96通道全自动核酸提取仪，提取核酸得率和纯度高，结果重复性好，批次间样品污染最小化。
一、细胞培养
凡知在体外模拟体内环境（无菌、适宜温度、酸碱度和一定营养条件等），使用液体培养基，使细胞生存、生长、繁殖并维持主要结构和功能。
二、RNA提取和cDNA合成
（一）RNA提取
以Hela细胞为例，凡知医疗以磁珠法为原理，使用FG高通量细胞RNA提取试剂盒提取Hela细胞RNA。先将细胞裂解，释放出RNA，然后通过不同方式去除蛋白、DNA等杂质，最终获得高纯RNA产物。
然而，蛋白质、DNA等杂质容易影响RNA的纯度和浓度，阻碍后续实验的良好进行。
1、如何去除蛋白质？
（1）磁珠法
凡知运用纳米技术对超顺磁性纳米颗粒的表面进行改良和表面修饰后，制备成超顺磁性氧化硅纳米磁珠，该磁珠能在微观界面上与核酸分子特异性地识别和高效结合，通过洗涤、洗脱，去除蛋白质。
图2：磁珠法与Trizol对比分析
（2）蛋白酶K
RNA提取试剂盒中含有蛋白酶K，可高效去除蛋白质。
2、如何去除DNA？
（1）提取液中加入NaOH溶液
RNA可溶于NaOH溶液，而DNA不可溶，离心后的上清液就可获得纯净的RNA。
（2）试剂盒提取
试剂盒中含有DNsae、DNaseⅠ稀释液，用于溶解DNA。
另外，为得到良好的下游实验结果，核酸提取出来后，不管是否立即做下游实验，都需要进行分装冻存，避免反复冻存造成降解，并减少污染风险。
3、培养细胞RNA提取注意点
另外，在培养细胞RNA提取过程中，还需要注意以下三点：
（1）悬浮细胞
可直接离心后弃掉培养基，用无菌PBS清洗1~2遍后，再用适量PBS悬浮起来，然后加入裂解液进行裂解。千万不要完全弃掉液体后，往沉淀细胞里直接加入裂解液，这样会使外表层的细胞裂解后释放的组蛋白包裹粘附在沉淀细胞外侧，从而限制沉淀内部的细胞与裂解液的接触，从而导致细胞裂解不彻底，降低RNA得率。
（2）半贴壁或贴壁不紧的细胞
弃掉培养基后，用PBS洗1~2次，直接吸取适量PBS，用吸管或者枪吹打培养皿，把细胞吹下来，转移到无RNA酶的EP管中，加裂解液进行提取。
（3）贴壁细胞
需要先用胰酶消化，然后收集到无RNA酶的EP管中，离心去其上清，用PBS洗1~2次，去除多余的胰酶，以适量PBS重悬后继续进行提取步骤。
（二）cDNA合成
cDNA的合成是RT-PCR的重要环节。以mRNA为模板，在逆转录酶的催化下，可合成互补的DNA（
