细胞传代培养原理
细胞在培养瓶长成致密单层后,已基本上饱和,为使细胞能继续生长,同时也将细胞数量扩大,就必须进行传代(再培养)。
传代培养也是一种将细胞种保存下去的方法。同时也是利用培养细胞进行各种实验的必经过程。悬浮型细胞直接分瓶就可以,而贴壁细胞需经消化后才能分瓶。
细胞传代培养具体操作
1、材料和试剂的准备
1)细胞:贴壁细胞株
2)试剂:0.25%胰酶、培养基(含10%小牛血清)
3)仪器和器材:倒置显微镜,培养箱、培养瓶、吸管、废液缸等
2、操作步骤
1)将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2)加入0.5—1ml0.25%胰酶溶液,使瓶底细胞都浸入溶液中。
3)瓶口塞好橡皮塞,放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移,原贴壁的细胞逐渐趋于圆形,在还未漂起时将胰酶弃去,加入10ml培养液终止消化。
观察消化也可以用肉眼,当见到瓶底发白并出现细针孔空隙时终止消化。一般室温消化时间约为1—3分钟。
4)用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液,分到另外两到三瓶中,实践培养液塞好橡皮塞,置37℃下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
科研实验中,细胞的体外培养一直是一个重要环节。细胞要养好,就要用好血清,如Ausbian特级胎牛血清,它适合各种细胞培养,尤其适合难养细胞,如:干细胞、肝细胞,神经细胞,原代培养、细胞融合、转染细胞等。
Ausbian特级胎牛血清所有血清出厂前,均经过严格质控,每个批次附有详细完整的《检测报告》,包括:品名,货号,批号,血源地,生产日期,保质期,pH值、渗透压、血红蛋白、总蛋白、球蛋白、IgG、内*素、无菌检查(细菌、真菌、支原体)、病*检查(如BVD、牛腺病*、细胞病变效应等)、促细胞生长能力、细胞*性、BVD-1/2抗体检查等。
实验人对于新批次血清,应认真审阅《检测报告》,做好试用前筛选第一步。(如何看懂《检测报告》,可登陆“缔一生物”