在普诺赛3月30日开播的细胞培养直播课堂中,有很多同学提出各种疑问。我们筛选出具有代表性的问题,并作了详细解答。
01动物细胞怎么鉴定?
要根据实验的目的以及细胞类型进行选择。如果是人源细胞系,并且有文献或数据库公布对应细胞信息,则进行STR鉴定即可;如果使非人源的细胞系,可以进行种属鉴定,并且附加一个研究方向相关的指标进行验证,部分小鼠细胞也可以做STR鉴定,但目前数据库不完全,很多都没有匹配数据。对于原代细胞,如果能够确保取材无误,仅进行特异性指标方面的检测就可以了,方法可采用免疫荧光、流式检测、WB检测等。
02发表高水平文章时,需要提供哪些文件呢?COA?STR?
目前公认的细胞鉴定文件为STR鉴定,对于不适用STR鉴定方法的细胞,可以根据自己的研究方向对细胞进行验证,方法没有限制,一些新的技术和方法的应用能够一定程度上提高文章的档次。
03原代细胞和细胞系有啥区别?
主要是传代次数上的差异。原代细胞一般指从动物组织直接提取的细胞,而细胞系是在原代培养的基础上经过传代和筛选得到。另外常用的细胞系,都是经过筛选得到的稳定细胞群体,特性在进行连续性实验时能够保证结果更加稳定,而原代细胞的优势则在于与机体细胞特征更加接近。
04pc12细胞高分化后,多次传代会影响实验结果吗?
PC-12(高分化)细胞是稳定的细胞系,正常传代不会改变细胞特性,但是传代过程中如果出现生长过度、污染等异常情况可能会导致细胞发生变化,所以建议在低代次时冻存保种。若是自行诱导建系的高分化PC-12细胞,则要看诱导后得到的细胞特性是否稳定,一般也是建议在细胞状态稳定时冻存,避免后续长期传代培养过程中出现意外。
05H22的STR为啥和NIH/3T3的STR基本相似?
首先要明确一点,H22和NIH/3T3两株细胞在特性上差异较大,混淆的概率非常小,而STR位点数据相似,可能是由于这两株细胞本身亲缘关系非常接近。由于很多品种的小鼠都是近交品系,同种小鼠本身亲缘关系就比较近,这就有可能导致不同的小鼠细胞会出现位点接近的情况,这也是目前小鼠STR没有广泛应用的原因之一。
06肿瘤相关成纤维细胞也需要自己鉴定吧?
做细胞鉴定需要先明确鉴定的目的。如果自己提取的肿瘤细胞或者癌旁的成纤维细胞,可以用免疫学的方法去确定得到的细胞是属于什么类型。
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