白癜风专家会诊优惠 http://m.39.net/pf/a_5777889.html今天我们介绍一种用得很广泛的检测细胞活性方法CCK-8。CCK-8具有很多优点：(1)比MTT更敏感；（2）对细胞无*性（3）步骤简单（4）性能稳定等。
CCK-8是CellCountingKit-8的简称，CCK-8性能很稳定，在室温避光的情况下可以保存6个月，在2-8℃可以保存2年，-20℃以下可以更长时间保存。
小编简单为小伙伴们介绍下CCK-8的使用方法，以药物处理贴壁细胞为例。
（1）首先，我们将对数期的贴壁细胞通过加入胰酶进行“消化”，使细胞脱落。
（2）待细胞大部分脱落时，加入两倍胰酶体积的含血清培养基终止消化。
（3）将（2）中液体全部转移至离心管，可用PBS缓冲液冲洗细胞培养瓶，将残留的细胞冲洗下来，并将PBS冲洗液一并转移至离心管
（4）r/min,离心3-5min
（5）弃去离心管上清，用1ml含血清培养基重悬。
（6）如果实验室配备了细胞计数仪，使用计数仪计数细胞；若没有细胞计数仪，可以使用牛鲍计数板计数。
（7）根据计数结果对细胞悬液进行稀释，保证细胞浓度在1×/ml
（8）种板：根据需要选择相应规格的板，这里以96孔板为例。设置一个空白对照，7个实验组，每组设置5个复孔。每孔加ul（7）中稀释好的细胞悬液。
（9）一般96孔板横向有1-12的数字标志，纵向有A-H的英文标志，小编横向选择3-10，纵向选择B-F接种，在边缘孔加2滴PBS缓冲液，减少蒸发带来的影响。
（10）一般接种12-24小时，细胞贴壁良好后，吸出各孔培养基。空白组加入不含药物培养基，实验组加入含不同浓度药物的培养基。放入孵箱培养数小时（这里药物不同可能作用时间不一样，有的是4小时，有的12小时，有的24小时，按实际情况选择）
（11）药物处理后，再次吸出各孔培养基。此时，加入含CCK-8的培养基，CCK-8占细胞培养基体积的1/10.
（12）放入孵箱培养0.5-4小时，待颜色变为橙色就可以拿出来检测。注意，这一步应随时观察颜色变化情况，不宜时间过长
（13）将96孔板取出，放入酶标仪检测（实验室其他可以检测96孔板吸光度的仪器也行），波长设为nm。
（14）处理分析数据，这里不再赘述。
好了，今天的分享就到这里，希望对小伙伴们有所帮助！
