MSC体外扩增的实验研究郑大中科博生 [复制链接]

MSC的免疫表型

具中科博生研究表明，一般认为，MSC细胞体积小，核浆比大，不表达分化相关抗原，如1刑胶原、Ⅱ型胶原、Ⅲ型胶原、碱性磷酸酶等；细胞贴壁附着后则细胞均一地表达SH2、SH13、CD29、CD4、CD71、CD90、CD、CDa、CD等多种表面抗原；尽管MSC与HSC共存于骨髓中，但MSC不表达造血系统的表面标志。目前尚无MSC特异性表面标志，对MSC的特征描述及其分离方法都是以个细胞群体的形式进行的。中科博生。

MSC的分离与体外扩增

早在20世纪70年代中期，Friedenstein(）就建立了MSC的分离及体外扩增方法，90年代，其他小组对该方法进行了改进。概括地说，将采集到的骨髓用密度梯度离心法(通常用1.g/ml的Percoll)分离出单个核细胞，按标准密度接种于含10%牛血清白蛋白的低糖DMEM培养基中培养4h后土细胞，开始为期14d左右的贴壁细胞克隆的原代培养，经系列消化传资是90%以上的细胞融合。中科博生。

研究表明，在低血清培养条件下，可以实现细胞的×真：增（扩增10倍以上，传代40代）,并使MSC的干细胞特性得以长期稳定维持，而不至于过早地分化。当向培养体系中加入成纤维细胞生长因子4（G等lastgrowthfactor4,FGF-4）时，MSC的扩增效率明显提高，表现为衰老对处增殖和对造血的支持能力加强。体外培养和扩增的MSC具有典型的纺锤、态，易于贴壁，单个细胞形成的克隆呈致密的放射状排列。中科博生。

分析体外培养的MSC可发现ALP活性的多样性，而且有些细胞只有向成骨细胞分化的潜能，提示MSC细胞群体中存在处于向成骨细胞不同分化阶段的干/祖细胞亚群。因此，在组织工程研究或临床应用中宜采用单克隆。中科博生。

体外扩增的MSC细胞质量评价

与HSC类似，体外扩增的MSC的细胞质量评价方法也分为体外和体内评价两种。

（1）体外评价

MSC体外评价的标准方法是集落形成（colony-formingunitfibroblast,CFU-F）的检测及CFU-F中克隆均质性的检测。在形态上，MSC与骨髓微环境中的成纤维细胞、内皮细胞等较为接近，同时MSC又缺乏特定的表面标志，因此易于混淆。成纤维细胞、内皮细胞属于终末分化的细胞，不具备多向分化的潜能。而体外定向诱导MSC向成骨、成软骨、成脂肪、成肌细胞等间充质系细胞分化的能力则是评价MSC细胞扩增质量的最科学的证据。中科博生。

（2）体内评价

有人用植入大鼠模型体内的扩散盒（diffusionchamber)检测MSC及其分化的各亚群成分。结果与体外定向诱导MSC分化的结果相似，均提示部分克隆具有向全部间充质系细胞分化的潜能，而部分克隆只有向特定系（如成骨细胞）分化的潜能。

中科博生期待大家一起探讨学习。