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角膜缘干细胞的生长郑大中科博生 [复制链接]

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具中科博生研究表明,由于干细胞对角膜创伤的愈合及透明性维持等方面具有重要作用,通过对体外培养的角膜缘干细胞增殖分化特性的研究可以加深对干细胞的认识,为将来进行异体干细胞移植准备条件。中科博生。

对角膜缘干细胞体外生长的增殖分化特性研究表明,上皮细胞生长因子对干细胞增殖有促进作用。方法是采用DMEM和F12培养基进行兔角膜上皮细胞培养,检测指标为克隆形成率(colonyformingefficien-cy,CFE)、免疫组化染色和蛋白质免疫印迹等方法检测细胞的增殖力和分化表达状况。中科博生。

结果表明角膜缘干细胞(limbastemcell,LSC)本培养条件下能够正常传代生长5代,CFE为5.07%±2.35%,而角膜中央上皮细胞(centralcornealepithelialcell,CCEC)仅第1次传代生长,CFE为1.12%±0.86%;LEC冻存后复苏率为0.43%士0.22%,CCEC为0.16%±0.07%,差异非常显著(p0.01),上皮细胞生长因子(epidermalgrowthfactor,EFG)在质量浓度为5ng/ml和20ng/ml时对细胞的促増殖作用最强。干细胞在培养初期,细胞角蛋白K3染色阴性,第2、3代时逐渐表达;而蛋白质免疫印迹检测早期(原代、第2代)为阳性,晚期(第4代)为阴性。中科博生。

检测确定部分角膜缘基底细胞是唯一不表达的角质蛋白K3的角膜上皮细胞,从而证实角膜于细胞位于角膜缘基底部。采用造血干细胞的脾CFE测定细胞的增值率显示,角膜缘干细胞在培养早期CFE较低,随着对环境的适应其增值潜力逐渐发挥出来,明显较中央上皮细胞高,与其他学者的研究结果类似。中科博生。

中科博生。细胞冻存复苏后测定的角膜上皮细胞CFE显示,角膜缘干细胞明显高于角膜中央上皮细胞。然而,由于细胞冻存复苏率普遍偏低,因此有待进一步研究新的细胞保存方法以满足实验的需要。在EGF的作用下,角膜缘干细胞的增殖能力提高超过角膜中央上皮细胞,尤其是在质量浓度为ng/ml时作用明显。中科博生。

而在质量浓度为ng/ml时作用则相对下降,说明该EGF在体外对角膜上皮细胞的促增殖作用有量效关系。

中科博生期待大家一起探讨学习。

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