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十一月
年，荷兰阿姆斯特丹大学JanPaulMedema研究组在NatureCellBiology发文题为Wntactivitydefinescoloncancerstemcellsandisregulatedbythemicroenvironment，揭开了Wnt信号通路在结肠癌干细胞中的作用，同时也发现结肠癌干细胞中的Wnt信号通路会受到肿瘤微环境的影响。
作为ReproducibilityProject:CancerBiology项目中计划重复的论文之一，复制实验的作者们首先按照步骤选定了需要重复的实验，并发表了注册报告，题为Registeredreport:Wntactivitydefinescoloncancerstemcellsandisregulatedbythemicroenvironment，并在年完成选定实验的重复，并将结果发表在eLife上。
正常结肠粘膜癌变过程中依赖于Wnt信号通路的改变，转录因子β-catenin受到APC复合体的严格调控。在生理条件下，Wnt活性对肠干细胞和隐窝细胞的稳态至关重要。APC或β-catenin的突变是结肠上皮细胞转化的早期事件，结直肠癌的确诊在当时也依赖于Wnt信号。APC突变通常会导致β-catenin降解的缺陷，并导致β-catenin在细胞核内的积累和Wnt靶基因的持续转录。这意味着可能所有的肿瘤的细胞中都包含活跃的Wnt信号。但事实是通过免疫组化的实验发现大多数的结直肠癌细胞中都具有显著的细胞异质性，说明在结肠癌细胞中具有复杂度Wnt信号通路的调控。原文作者们的工作发现Wnt信号高度活跃的结肠癌细胞是肿瘤干细胞，因此可以用Wnt信号的高活性来定义结肠癌中的肿瘤干细胞，并且发现Wnt信号通路是受到肿瘤微环境的调控。
复制实验的作者们计划重复与Wnt表达、致瘤性等相关的实验结果Fig2F、Fig6D以及Fig7E。为了评估Wnt信号通路在结肠癌干细胞中的活性，作者们将原代培养结肠癌细胞以及Wn报告因子TOP-GFP进行转导，其中主要包括三种的独立的培养方式，一种来自于的原始研究，另外两种来自于人类结肠癌原代组织。TOP-GFP质粒转导后，分离TOP-GFP单细胞培养物，这一方法与最初的研究相同。单细胞来源的TOP-GFP培养显示出Wnt信号的异质性（图1），与原始研究中报道的相似。
图1复制实验：原代结肠癌组织与原代培养结肠癌细胞系均具有Wnt报告因子异质性
然后通过荧光激活细胞分选将TOP-GFP细胞分为最高10%和最低10%的TOP-GFP表达细胞，并分析原始研究中报道的相同的细胞表面标记物的表达。在三种培养条件下，与低TOP-GFP表达水平相比，TOP-GFP高的细胞群体中CD+或CD+细胞的富集程度更高，CD29+细胞的表达也更多。最初的研究表明，CD、CD29、CD24、CD44、CD的表达与TOP-GFP高表达相关。但原始论文中的数据中关于这些细胞标记物与TOP-GFP相关性没有更为数据化的表述，所以很难直接通过量化的方式去衡量的流式分选以及细胞标记物的结果。
图2原文结果：高TOP-GFP细胞群体的细胞标记物
既然认为Wnt活性较高的是肿瘤干细胞，原始论文中一个非常关键的实验是对具有不同Wnt信号活性的细胞群进行克隆原性（Clonogenicity）的比较（图3）。原文作者们发现高TOP-GFP的细胞克隆原性高于低表达的细胞，但是复制实验的作者们的并未发现如原文中那么大的免疫原性的差异，而且通过HGF或者MFCM这些增加克隆原性的药物进行处理也没有太显著的变化（图3）。
图3原始论文vs复制论文：对于稀释后TOP-GF细胞克隆原性的比较
进一步地，复制实验的作者们对TOP-GFP细胞注射到裸鼠中形成肿瘤的频率进行检测。该复制实验主要包括高表达的TOP-GFP、低表达的TOP-GFP以及低表达的TOP-GFP加上增加克隆原性的MFCM药物共注射。加入MFCM的共注射会增加致瘤性，这与原始研究中的实验结果方向一致。但复制实验的作者们发现高表达的TOP-GFP与低表达的TOP-GFP细胞致瘤性没有统计学显著性差异。
总的来说，该复制实验的工作的发现高表达Wnt信号结肠癌细胞表面标记物CD、CD以及CD29，但并不包括原文中提到的CD44和CD24。其次，Wnt高活性的细胞也并不具有更高的克隆原性，另外体内的致瘤性研究也未能得到重复。
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