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荧光链霉亲和素缀合物 [复制链接]

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链霉亲和素及其衍生物,与生物素类似,链霉亲和素分子本身也较小,同时也可以与生物活性大分子(例如抗体)广泛结合而不会对其功能产生影响,因而得到广泛的使用。

一、什么是链霉亲和素?

链霉亲和素(streptavidin下称SA)是与亲和素(avidin下称AV)有相似生物学特性的一种蛋白质,是streptomycesavidinii菌的分泌物,其分子量及结合生物素的能力与鸡蛋清中的亲和素相似,等电点6.0,非特异性结合远比亲和素低。

二、链霉亲和素来源:

SA是Streptomycesavicllrdi菌培养过程中的分泌产物,主要通过2一亚氨基生物素亲和层析法提纯,1L培养液中含蛋白10~60mg。

三、链霉亲和素组成

链霉亲和素分子由4条相同的肽链组成,其氨基酸组成中,甘氨酸和丙氨酸的含量较大,而且结合生物素的活性基团也是肽链中的色氨酸残基;链霉亲和素是一种稍偏酸性(pH6.0)的蛋白质,并且不带任何糖基。在蛋白水解酶作用下,链霉亲和素可在N端10~12和C端19-21间断裂,形成的核心链霉亲和素仍然保持完整的结合生物素的能力。链霉亲和素的活性单位也是以结合1μg生物素所需的量来表示,1mg链霉亲和素的最高活性可达18U。

四、链霉亲和素及其衍生物相关

酶标记的链霉亲和素结合物酶标记的链霉亲和素缀合物通常用于酶联免疫吸附测定(ELISA),免疫组化(IHC),免疫印迹(WB)和原位杂交技术(FISH)。辣根过氧化物酶(HRP)和碱性磷酸酶(ALP)因其周转率高,稳定性高,易于缀合和成本低等优点而被广泛用作报告标签。

FFPE肺腺癌组织中EpCAM的IHC检测:将人腺癌组织切片与兔抗EpCAM一抗随后进行生物素化的山羊抗兔IgG(H&L)孵育。然后将样品与HRP-链霉亲和素一起孵育,并使用ReadiUseStayrightPurple(Cat#)进行显色。

2.荧光链霉亲和素缀合物

荧光链霉亲和素偶联物广泛用于荧光成像中,以检测生物素化的抗体,配体和DNA探针,用于原位杂交技术(FISH),免疫组织化学(IHC)和多色流式细胞术(FC)。

iFluor链霉亲和素缀合物

用iFluor染料标记的链霉亲和素缀合物具有异常明亮和稳定的荧光,胜过AlexaFluor和其他光谱相似的缀合物。iFluor链霉亲和素偶联物设计用于多种细胞分析和蛋白质分析应用,包括成像(IF),流式细胞术(FC)和荧光免疫印迹。作为提醒,在检测低丰度靶标时避免使用蓝色荧光链霉亲和素偶联物。蓝色荧光染料具有较低的荧光,并且比其他染料具有更高的非特异性背景。

HeLa细胞中α-微管蛋白的免疫荧光染色:将固定和透化的HeLa细胞中的α-tubulin与兔抗tubulin一抗一起孵育,然后与生物素化的山羊抗兔IgG(H&L)(Cat#)进行孵育,然后加入iFluor-链霉亲和素偶联物(Cat#),使用DAPI(Cat#)对细胞核进行复染。

文章来源:每日生物评论

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