今天，我们详细的讲慢病*包装。
慢病*（Lentivirus）是逆转录病*的一种，它能够将靶基因导入到一些较难转染的细胞，如原代细胞等，并且将靶基因随机整合到宿主的基因组中，从而大大增加了感染效率，并且能够在细胞系中稳定表达若干代，可以进行稳转细胞株的筛选。
(慢病*)
慢病*载体可将外源基因/shRNA有效地整合到宿主染色体上，从而达到持久性表达目的序列的效果。携带有外源基因的慢病*载体在慢病*包装质粒、细胞系的辅助下，经过病*包装成为有感染力的病*颗粒，通过感染细胞或活体组织，实现外源基因在细胞或活体组织中表达。
（包装过程模式图）
详细流程
慢病*的储存
短时间内使用可将病*暂时放置于4℃保存（请尽量在三天内用完），如需长期保存需放置于-80℃。
注意事项：
病*可在-80℃储存6个月以上，但如病*存储时间超过6个月，在使用前需重新滴定病*滴度；
反复冻融会降低病*滴度：每次冻融会降低病*滴度10%，因此在病*使用过程中应尽量避免反复冻融，为避免反复冻融建议按照每次的使用量对病*进行分装；
慢病*的优势
慢病*能够感染多种难以感染的细胞，如原代细胞、干细胞、不分裂细胞（神经元细胞）等；
慢病*能将外源基因整合到细胞基因组中，稳定表达外源基因；
慢病*感染筛选稳定细胞株所需时间较短；
免疫原性低，安全性高。
慢病*包装常见问题
Q1.
什么是MOI值？
MOI(病*感染复数)，一般认为其是一个比值。MOI的含义是感染时病*与细胞量的比值，即MOI=病*滴度x体积/细胞数量。
Q2.
慢病*如何稀释？
根据MOI值，用常规培养基/生理盐水/Hanks/PBS液等将慢病*稀释到需要的滴度(可按照10倍梯度稀释)。
Q3.
Q3.加入慢病*后，细胞死亡，如何处理？
这种情况是由于慢病*对细胞具有一定的*性，需要调整并降低感染的MOI值，并且感染后，定时观察细胞状态，若细胞状态差，则需对细胞进行换液操作，用新鲜的完全培养基替换病*感染培养液。
Q4
如何确定慢病*感染靶细胞的感染效率？
慢病*感染靶细胞的感染效率可通过qPCR检测靶细胞中的慢病*载体拷贝数来计算。另外如果构建的慢病*载体带有标记基因（如GFP、RFP等）则可以通过荧光显微镜下观察进而评估感染效率。
Q5.
慢病*感染细胞后什么时候的基因表达到达峰值？
细胞感染后48-72h能够观察到荧光，部分难感染的细胞需要96h或更长，可进行抗性筛选增加阳性细胞比例。
（病*感染示意图）
今天的教程就到这里啦~
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