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TUhjnbcbe - 2023/10/20 17:07:00
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产品信息:

T25细胞到货处理

观察:

1、收到细胞后,请及时核对培养瓶上标注的细胞名称是否与订购的细胞名称一-致以及培养瓶是否有破损或漏液等异常情况。

处理:

1、75%酒精棉球擦拭T25细胞培养瓶外部。

2、显微镜观察细胞生长情况,并对细胞进行不同倍数拍照保存(40x,x,x各--张)前三天照片为重要售后依据,不提供照片默认收到状态良好。.

3、不要打开培养瓶盖,将细胞放入37度培养箱中静置3-4小时后再做处理,以稳定细胞状态。

4、收到细胞后,及时查看说明书是贴壁细胞还是悬浮细胞形态,并按常规贴壁或悬浮细胞的传代方法操作。

贴壁:未超过80%汇合度时,将瓶装的完全培养液收集至离心管中,留5ml完全培养基,放入37"C、5%C02孵箱培养;超过80%汇合度时,根据情况传代或者冻存,具体操作见细胞培养步骤。首次传代,建议1:2传代(两个T25)。(传代时建议一瓶用原瓶里面的完全培养基,另外--瓶用自己配的完全培养基,进行对比培养。)

特殊细胞注意事项:个别细胞贴壁不牢,在运输过程中发生细胞脱落,这是正常现象。

请将培养瓶所有培养液收集至离心管,0rpm离心5min,收集上清(后期对比培养使用),沉淀加入胰酶1-2ml,轻轻吹打,重悬,消化1-2分钟后,加5ml完全培养基终止反应。再离心,弃上清,加1-2ml完全培养基重悬。然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37°C,5%CO2细胞培养箱中培养。

(注意:如收到密封培养瓶,处理完后放入培养箱培养时要将培养瓶盖子拧松)

冻存细胞到货处理

1、收到细胞后,检查外包装情况和箱内是否还有干冰。如有外包装破损干冰已完全挥发等问题联系客服。

2、将细胞取出转移至液氮或-80度冰箱保存,建议尽早复苏。

3、复苏第一管如有活性状态问题及时与我们联系,会有技术人员与您沟通指导后再复苏第二管。特别说明:未与我方联系擅自复苏第二管出现问题不予售后。

细胞复苏

1、从液氮中取出细胞冻存管(注意:佩戴防爆管面具),快速将其置入37"C水浴中解冻,直至冻存管中无结晶,然后用75%的酒精擦拭冻存管外壁;

2、将冻存管中的细胞移至含5ml完全培养基的15ml离心管中,0rpm离心5min;

3、弃上清,沉淀用5ml完全培养基重悬,接种T25培养瓶,于37°C,5%CO2细胞培养箱中培养;

4、第二天,换用新鲜完全培养基继续培养。

细胞传代

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞--次:

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,0rpm离心5min;

3、弃.上清,沉淀细胞用1-2ml完全培养基重悬,然后按1:2比例进行分瓶传代(两个T25),补充新的完全培养基至5-8ml/瓶,最后放入37°C,5%CO2细胞培养箱中培养;

细胞冻存

1、细胞生长至覆盖培养瓶的80%面积时,弃T25培养瓶中的培养液,用PBS清洗细胞一-次;

2、添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml至培养瓶中,倒置显微镜下观察,待细胞回缩变圆后加入5ml完全培养液终止消化,再轻轻吹打细胞使之脱落,然后将悬液转移至15ml离心管中,0rpm离心5min;弃上清,沉淀细胞加入1ml/支的富衡无血清冻存液(FH),混匀后加入冻存管中。(如:冻一支,加入1ml无血清冻存液)

4、将冻存细胞直接放入一80°C冰箱即可;如后期要将细胞转入液氮罐中,需在-80°C冰箱存放24小时以上。

本库的细胞系(株)仅用于科研工作。

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