TUhjnbcbe - 2023/11/6 21:38:00
如今，结核病仍是世界头号的传染病杀手。年，全世界估计有万人新患上结核病，并有万人因此丧生。引起结核病的结核分枝杆菌（Mycobacteriumtuberculosis）通过呼吸道入侵人体并引起肺部病变。通常，宿主的免疫系统会识别并清除结核分枝杆菌，以防止感染的进一步扩散。然而，这种细菌并不是那么容易对付的，它会想方设法逃避宿主免疫系统的监视。至于它是如何逃逸的，现在人们还没有完全弄清楚。重庆大学吴海波课题组近日通过调节宿主miR--3p的表达，发现了结核分枝杆菌新的免疫逃逸途径。这不仅有助于了解结核分枝杆菌的免疫逃逸，还为耐药结核病的疗法开发提供了理论基础。这项成果于年6月发表在mBio杂志上。01miR--3p与结核分枝杆菌的存活有关吴海波课题组之前的研究表明，小鼠被结核分枝杆菌气溶胶感染后，microRNA--3p（miR--3p）的表达上调。同样地，他们发现与健康对照相比，潜伏性结核病患者的miR--3p水平更高，表明这种miRNA在结核分枝杆菌的存活中发挥重要作用。为了确定miR-在结核分枝杆菌感染中的作用，研究人员首先以感染结核分枝杆菌的RAW.7巨噬细胞为对象，分析了miR-转录本的表达水平。他们发现，pri-miR-、pre-miR-和miR--3p的表达水平在感染后均增加。同时，小鼠骨髓来源的巨噬细胞（BMDM）在感染后24小时也观察到miR--3p的上调。之后，他们又用miR--3p模拟物和抑制物来转染RAW.7细胞。结果表明，在模拟物存在时，结核分枝杆菌的存活率得到了提高。相反，经过抑制物处理后，结核分枝杆菌的存活受损。与野生型小鼠相比，Mir敲除小鼠在感染结核分枝杆菌后的中位生存期显著延长。这些数据表明，miR--3p在结核分枝杆菌感染后上调，且不利于宿主形成对结核分枝杆菌的抵抗力。02LNX1是miR--3p的直接靶点接下来，研究人员分析了miR--3p在结核分枝杆菌感染期间是否靶向和调节特定的基因。他们通过数据库预测了miR--3p的靶点，并选择Lnx1开展进一步的研究。Lnx1的3’UTR中含有miR--3p的特异性结合位点。他们将Lnx1的3’UTR及其突变体克隆到荧光素酶报告载体后，与miR--3p模拟物一起转染到HEKT细胞中。他们发现野生型3’UTR中的荧光素酶活性下调，而突变体则没有下调。为了进一步证实miR--3p在调节LNX1中的作用，研究人员又通过Westernblotting评估了LNX1的表达水平。结果显示，LNX1在miR--3p模拟物存在时受到抑制，而在miR--3p抑制物存在时上调。他们接着用γ射线照射的结核分枝杆菌来感染野生型小鼠的BMDM细胞以及RAW.7细胞，发现感染阻止了两种巨噬细胞中LNX1的表达，但来源于Mir缺陷型小鼠的BMDM中却未出现这种现象。这些结果表明，miR--3p靶向LNX1，抑制其在结核分枝杆菌感染期间表达。03LNX1促进NEK6的多聚泛素化那么，LNX1在结核分枝杆菌感染期间发挥了什么样的作用？研究人员首先利用酵母双杂交系统来筛选LNX1的相互作用蛋白。通过软件预测和Westernblotting筛选，他们选择了NEK6，这是一种丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶，在几种组织中普遍表达。他们发现，NEK6的变化与LNX1呈负相关。体外和体内的实验均表明，LNX1是NEK6的负向调控分子。之后的免疫共沉淀和体内pulldown实验结果表明，LNX1与NEK6之间存在着直接的相互作用。他们还发现，miR--3p过表达抑制了NEK6-LNX1相互作用，而miR--3p抑制则增强了这种相互作用。由于LNX1与NEK6之间存在反向关联，故研究人员分析了LNX1存在或不存在时的NEK6多聚泛素化。后续研究表明，LNX1是一种E3泛素连接酶，它直接与NEK6结合，并促进NEK6的多聚泛素化以及蛋白酶体介导的降解。04NEK6通过激活STAT3而抑制细胞凋亡接下来，研究人员进一步研究了NEK6在结核分枝杆菌存活中的特定作用。由于NEK6是一种靶向STAT3的蛋白激酶，因此他们首先