多重免疫组化，主要的技术原理来自TSA技术，TSA即酪酰胺信号放大(Tyramidesignalamplification)是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白或核酸进行高密度原位标记的酶学检测方法。该技术可与高性能染料AlexaFluor、传统荧光染料和比色检测系统相兼容。TSA主要原理是利用酪胺Tyramide的过氧化物酶反应(酪胺盐在HRP催化H下形成共价键结合位点)，产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基(包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基)结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的生物素沉积，与随后加入的Streptavidin—HRP/荧光基团结合，经几次这样的循环放大，可以结合大量的酶分子or荧光基团，结果使其检测信号得到几何级放大。
简单来说，用这种方法做多重免疫荧光是利用二抗上带有的HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在HRP和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉，共价结合的荧光素还留存在样品上。再换个一抗来第二轮孵育，周而复始。等到所有抗体孵育结束，荧光素都结合好后，最后去检测结果。
1.由于每次体系中都只有单一抗体孵育，因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗二抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。2.TSA技术可以用于检测用传统方法无法检出的低丰度靶标。基于酪酰胺的信号放大技术能够提供极强的敏感度、检测极微量的目的抗原。极大的降低抗体的用量，节约抗体，实测确实可以显著提升抗体的稀释比例。3.荧光法多重免疫组化，可同时进行五个颜色通道以上，这种情况下发射光谱会重叠，我们可以借助多光谱成像系统来解决这个问题。这是传统间接荧光法染色和显色法多重免疫组化所做不到的。这种方法能真实反映关键蛋白的表达情况和相互之间的关系，从而极大地节约珍贵的样品。
*我们可以提供的服务：Absin多重荧光免疫组化服务提供预实验验证-染色-拍照-分析全过程。最多六指标七色（含DAPI）的多色免疫组化服务（芯片最多四指标五色），样本涵盖石蜡切片、冰冻切片及组织芯片（TMA），组织大片请提供单块组织切片，FFPE样本，厚度3-5um。正式实验最好每例2张，1张备用。预实验样本数量根据预实验方案定。(*所有抗体指标需要您提供)
*我们可以提供的服务结果：1.五色及以下提供全片X（相当于物镜20X，目镜10X）原图，六七色提供指定视野X图片，选定视野一般默认3视野，超过视野单独收费，收费标准根据具体情况订，提供看图软件可在客户端打开。数据上传网盘1G以内，或用U盘寄送1G以上。2.客户指定区域的单细胞分析结果：①单阳性细胞占有核细胞百分比，密度。②双阳性细胞占有核细胞百分比，密度。③组织面积和特定病理形态面积计算。④TMA提供每个芯点的以上定量结果。
1.人T细胞活化状态检测CD3CD69HLA-DR
2.类器官体外检测、肿瘤标志物检测
3.同源小鼠肿瘤PD实验
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