细胞名称：小鼠肝癌细胞
细胞别称：HEPA1-6;Hepa-1-6;Hepa1-6
产品货号：TCM-C
种属来源：小鼠
组织来源：肝
细胞形态：上皮细胞样
生长特性：贴壁生长
培养体系：DMEM-H+10%FBS+1%Glutamax+1%SodiumPyruvate+1%P/S
传代比例：1:3-1:6，每2-3天换液一次
传代周期：48-72h
培养条件：气相：95%空气+5%CO2，温度：37℃
冻存条件：60%基础培养基+30%FBS+10%DMSO，液氮储存
质量检测：细菌、真菌、支原体检测均为阴性
参考文献："DarlingtonGJ.Livercelllines.MethodsEnzymol.:19-38,.PubMed:DarlingtonGJ,etal.Expressionofliverphenotypesinculturedmousehepatomacells.J.Natl.CancerInst.64:-,.PubMed:"Hepa1-6细胞复苏推荐使用海星生物Hepa1-6细胞配套专用培养基货号：TCM-C
(1)开启37℃水浴锅。预热完全培养基，提前将细胞从液氮中取出，放于-80℃冰箱，让冻存管中液氮挥发。(2)洁净工作台内准备15mL离心管，加入5mL预热的完全培养基。(3)从-80℃冰箱中取出细胞。快速将冻存管置于37℃水浴锅内，快速晃动，使冻存液迅速融化。注意:①融化过程必须晃动冻存管，保证冻存液融化均匀。晃动时应避免水没过管盖增加污染风险。②管内冻存液融化至只剩一个约2mm直径的冰晶时，可停止水浴。继续晃动冻存管至冰晶融化。
(4)用75%酒精消毒冻存管表面。在洁净工作台内小心开盖，尽量避免气泡溢出，轻柔吹打数次，转移至预先准备的离心管内。用少量完全培养基洗涤冻存管1~2次，一并收集至离心管内。
(5)g离心4min。离心后去除上清。加入2mL完全培养基，轻柔吹打细胞沉淀，充分吹散、混匀。（如有台盼蓝可取少量细胞悬液进行染色计数）
(6)将细胞平均接种到1个T25培养瓶或底面积相当的培养容器中，加入足量完全培养基，摇匀细胞，将培养容器放入培养箱中培养。
注意:整个细胞复苏过程在尽可能5-10min内完成。
(7)复苏次日，观察细胞状态并换液。
注意:细胞接种24h内不应扰动。Hepa1-6细胞传代细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。(推荐传代比例1:2-1:4，首次传代建议1:2)(1)准备离心管、培养瓶以及无菌枪头等，提前预热完全培养基、胰酶、PBS。
细胞完全培养基(货号TCM-C)胰酶0.25%Trypsin-0.04%EDTA（货号:GUTP-R，以下简称）1×PBS（货号:GUPB-R，以下简称PBS）
(2)抽走培养瓶内培养基，加5mLPBS润洗1-2遍，清除残留培养基。
(3)尽量吸干润洗的PBS后加1mL胰酶，摇晃使胰酶均匀覆盖瓶底，放置培养箱37℃消化。
(4)消化时每隔1min拿出来观察，镜下可见细胞明显回缩，轻拍培养瓶部分细胞开始脱落时立即加入3-4mL含血清的培养基终止消化，吹落贴壁的细胞。
注意:控制吹打力度轻柔，吹打次数不可过多，避免机械损伤
(5)将细胞悬液转移至离心管中，rpm，3min离心收集细胞。
(6)在新的培养瓶中加入适量新鲜培养基；（T25推荐5mL，T75推荐10-15mL）。
(7)离心完成后，弃上清，加入适量新鲜培养基轻轻重悬吹散细胞，将细胞悬液均匀接种至培养瓶中，十字法或8字法混匀，然后放入培养箱中继续培养，注意培养瓶盖透气。Hepa1-6细胞冻存推荐使用海星一步冻存液（即用型、无血清、无需程序降温）货号：GUCP-R
(1)待细胞生长至可传代的密度，即可准备冻存。(2)消化细胞，取少量细胞悬液计数。细胞悬液经g离心4min。(3)离心后去除上清，用适量4℃预冷的冻存液重悬细胞。将细胞按比例或数量分装至冻存管中。一般冻存密度为(1.0~2.0)×10^6个/mL。注意:细胞长时间在非培养条件下放置会严重影响细胞的状态。如离心后用冻存液重悬计数，请将细胞放置于4℃冰箱内，以减弱细胞代谢，较好的保持细胞状态。(4)如使用海星一步冻存液，冻存管直接竖直放入-80℃冰箱即可完成“一步”冻存。如使用程序冻存液，需将冻存管放入提前预冷的程序降温盒后放入-80℃冰箱。(5)24小时后可将冻存管转移到液氮进行长期保存。注意:细胞不可长期保存在-80℃冰箱中。建议24h后尽快转移至液氮中。Hepa1-6细胞培养注意事项
(1)培养时细胞碎片可能会比较多如果在密度较大时传代，碎片数量也随之增加。碎片较多时，通过PBS润洗和换液清除碎片。
(2)细胞形态多变这与细胞密度、实际培养条件和操作相关。Hepa1-6在低密度和高密度状态下，形态有较大差异。低密度时细胞形态各异，呈多角形；高密度时细胞形态更均一，呈铺路石状。有少部分贴壁细胞呈发亮的球形，是正常现象。
(3)Hepa1-6细胞贴壁弱，消化时间偏短，注意控制消化时间。
以上内容由海星生物（