1.划线选定的BAC克隆到一个添加氯霉素的LB琼脂平板上。37C培养过夜。.
2.挑选一个单菌落，接种到5mL添加氯霉素的LB培养基中。37C,/min振荡过夜。
3.准备转化用培养物。
i.转移1mL或2mL过夜培养物(步骤2)到一个含有50mL添加氣霉素的LB培养基的mLCorning离心管中。
ii.37C剧烈振荡生长细胞4~5h,使0D达到0.6~0.8(用分光光度计测定细胞浓度)。
ii.转移细胞到50mLFalcon管中。
4.g,4C离心10min收集细胞(J6-MIBeckman-Coulter离心机)。
5.用等体积冷的10%甘油重悬沉淀。g,4C离心10min(J6-MIBeckman-Coulter离心机)。此步重复1次。
6.尽可能地将.上清液倒出，以移除甘油，用终体积为μL的冷的10%甘油轻轻重悬细胞。
7.将电转感受态细胞以40μuL小份分装到无菌管中，-80C保存。电击转化BAC细胞
8.在冰上融化40μLBAC感受态细胞，加入2μL的pLD53.SCAB/AB-boxDNA(0.5μg/μL)。轻轻混合管子，冰上温育1min。
9.将样品转移到一个冷的0.1cm小杯中，放到Bio-RadGenePulserII电击转化仪上。采用脉冲控制器2，1.8kV/25μF参数的电压/电容进行电击转化。