小编梳理了RNA常规样本采集方法和送样量，希望可以帮助各位老师更好的搞定样本准备工作！
采集方法
一、植物
（1）根据实验目的选择样本相关区域，优选幼嫩新鲜的样本组织可获取较多的核酸；
（2）植物样品采集时建议用RNasefree水擦拭样本后用吸水纸吸干，尤其对于野外样品；
（3）组织样品的分离尽量在冰上快速进行，减少RNA降解。然后迅速放入已做好标记的50mL离心管或封口袋中（根据样本大小和数量也可用1.5mL和2mLEP管），液氮速冻后用封口膜密封，-80℃保存或用大体积干冰进行送样；
（4）植物纤维含量较高，应采集尽可能多的样本并备份（1-2份）以防备重新取材；
（5）对于多糖多酚的难提组织样本，需提前与实验人员联系并在送样时进行备注；
（6）不建议植物组织样本使用RNAlater等RNA保护剂保存，因为植物细胞壁的存在，试剂较难渗透到细胞中。
二、动物
（1）活体取材后的组织用RNase-free的0.9%生理盐水冲洗，去除血渍和污物，并剔除非研究所需的组织，吸干水渍并切小块（厚度小于5mm厚约为50mg左右的小块），放入已标记好1.5mL或者2.0mL的RNase-freeEP管中，迅速液氮冷冻后用封口膜封口，再将EP管放置于50mL离心管中或封口袋中，-80℃冰箱保存或用大体积干冰运输；
（2）动物组织中内源性核酸酶含量丰富，所以样本采集应越快越好，样品分割的时候最好在冰上快速进行，并及时做好备份（1-2份）；
（3）一般情况下，RNA保护剂对于动物类样本都可使用，比如小体积的昆虫类组织，如寄生蜂、螨等，RNA保护剂的使用参照试剂说明书。
三、菌类
3.1液体培养基：
挑取单菌落于50mL液体培养基中，适宜温度培养过夜，在对数生长期（OD值为0.6-0.8）采集菌体。采集适量菌液转入合适的离心管中，高速离心收集菌体，弃去上层培养基，液氮速冻后用封口膜封口。若菌体离心管为1.5-2mL的小量程，建议在外层套上50mL的大离心管，以防止小管子冻裂菌体被污染。-80℃冰箱保存或用大体积干冰运输送样。
3.2固体或半固体培养基：
平板培养的微生物，在菌体生产最旺盛时期用灭菌后的勺子在平板中刮下，置于1.5或2.0mL的离心管中，迅速液氮速冻，建议在外层套上50mL的大离心管，以防止小管子冻裂菌体被污染。-80℃冰箱保存或用大体积干冰运输，在收集菌体时不要刮到培养物。
注意
为保证实验的顺利，样品同样建议备份1-2份，以防备部分样本降解重新取样、制备和送样；菌体类样本不建议用RNAlater保存，因为RNAlater密度较大，后续提取菌体不易分离；菌体类样本不建议用TRIzol保存，大部分菌类样品使用TRIzol法提取不成功。四、细胞
4.1贴壁细胞：
（1）贴壁细胞培养或处理结束后，去除培养液，贴壁细胞用PBS缓冲液快速洗一次；
（2）按每10cm2培养面积（相当于六孔板一个孔或35mm直径培养皿）加1mLTRIzol的比例加入TRIzol试剂；
（3）用1mL枪头反复吹打，使TRIzol与细胞充分接触并消化；
（4）将上述溶液转移到RNase-free的试管中（1.5或2mL离心管），用一次性注射器反复吹打细胞直至看不见成团的细胞块，使溶液呈现清亮且不粘稠的状态；
（5）液氮速冻后放入干冰或于-80℃冰箱中保存。
4.2悬浮细胞：
（1）悬浮细胞培养或处理结束后，离心收集细胞，去除培养液；
（2）保留的细胞用PBS缓冲液快速洗一次，离心除去PBS缓冲液；
（3）按照每1×-5×个细胞加1mLTRIzol的比例加入TRIzol试剂，用一次性注射器进行反复吹打直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮且不粘稠的状态；
（4）液氮速冻后放入干冰或-80℃冰箱中保存。
五、血液样本
5.1全血：
全血类样本即是不区分血细胞、血浆和血清等成份，最终获取的RNA是样本的总RNA，对于这类样本有两种采集办法：
TRIzol法：
（1）取一个15mL管，加入6mLTRIzol和2mL新鲜血液（比例为3:1），用移液器吹打多次帮助裂解样品中的细胞。
（2）样品剧烈震荡混匀1-2min，直到絮状物全部溶解；
（3）室温孵育5min让核蛋白完全分解；
（4）编写记号，封口膜密封，液氮速冻，80℃冰箱中保存，干冰送样。
注：冰冻血液溶解过程中破碎的细胞会释放RNA酶，引起RNA降解，因此此类样品要求在冰冻前进行分装，避免再次溶解分装造成RNA降解。
PAXgeneRNAtμbe法（人血样本推荐）：
采用BD管采集（全血RNA管）血液2mL（BD管容量为2.5mL）后进行保存，操作方法见产品说明书。采用Qiagen专用试剂盒提取RNA（PAXgeneBloodmiRNAKit）进行提取。
5.2血细胞
以哺乳动物采集白细胞或者其他有核细胞进行后续实验，方法如下：
（1）在已加入抗凝剂（因肝素会影响下游建库测序，建议选用EDTA类抗凝剂）的新鲜全血中加入等体积PBS（1×），充分混匀；
（2）缓慢转入另一已加入淋巴细胞分离液的离心管中，并使上述混合液处于淋巴细胞分离液液面之上（即两种液体不要混合，保留清晰的界面），20℃，g离心30min；
（3）用移液器小心分离出白细胞层；用PBS（1×）清洗白细胞，离心回收白细胞，弃去上清；
（4）加入白细胞20倍体积的TRIzol试剂，用一次性注射器进行反复抽打细胞直至看不见成团的细胞块，整个溶液呈清亮而不粘稠的状态；
（5）液氮速冻后放入干冰或-80℃冰箱中保存。
注：非哺乳动物可直接寄送加有抗凝剂（因肝素会影响下游建库测序，请选用除肝素外的其它抗凝剂）后液氮速冻的的全血样本。
5.3血清样本
（1）用医用血清管收集全血或旋盖管收集全血样本，上下轻轻颠倒混匀后，立即将全血置于4℃或冰盒中正立放置3-4小时，可见血块析出（也可放置4℃冰箱过夜）；
（2）rpm，4℃离心10min离心分离得到上层血清样本，取出上清后可再rpm，4℃离心10min保证血清质量（血样需在1h内进行血清分离，依据血清管操作说明或实验室血清分离步骤进行操作）；
（3）将上清转移至1.5mL旋盖尖底离心管中（RNasefree），每个管子吸入μL血清进行分装，弃去血细胞沉淀；
（4）将分装好的血清置于-80℃长期保存；
注：送样量最好4mL以上，注意血液若发生溶血现象不建议使用（血细胞破裂后细胞中RNA进入血清中）。
5.4血浆样本
（1）用加有抗凝剂（因肝素会影响下游建库测序，建议使用EDTA类抗凝血剂）的旋盖管收集全血样本；
（2）下轻轻颠倒混匀十次后，立即将全血置于4°C或冰盒中正立放置3-4h，rmp，4℃离心5min，取上清即为血浆（血样需在1h内进行血浆分离，依据抗凝管操作说明或实验室血浆分离步骤进行操作）；
（3）将上浆转移至1.5mL旋盖尖底离心管（RNasefree）中，每个管子吸入μl血浆进行分装，弃去血细胞沉淀；
（4）将分装好的血浆置于-80°C长期保存；
注：送样量最好4mL以上，注意血液若发生溶血现象不建议使用（血细胞破裂后细胞中RNA进入血清中）。
美格基因转录组产品线共包括转录组、RNA-Seq、SmallRNA、lncRNA、环状RNA、全转录组等测序分析服务，接收样品类型包括组织样品和RNA样品。
组织送样量
表1.组织送样标准一览表
分装建议：
（1）植物组织建议mg左右分装，动物组织50mg左右分装，菌体要求OD约为0.6-0.8，-cfμ/mL；
（2）不同类型样本的RNA产量差别较大，含肌纤维、脂肪类物质的动物组织以及含多糖多酚较高的复杂植物，RNA提取率一般较低，送样量需要增加；
（3）代谢活跃的肝脏组织细胞量旺盛，每50mg组织可达20-30μgRNA，可适当降低送样量；
（4）每份样本请尽量多管分装，并同时寄送备用样品和试提样品。
RNA送样量
测序产品对RNA数量和质量都有对应的要求，评判指标一般有以下包括浓度、单次建库所需总量、RIN值、OD/、电泳胶图（条带位置、亮度、比例等）等，具体指标见下文表格。RNA样本请提供具体浓度、体积、制备时间、溶剂名称及物种来源，同时附上QC数据，包括电泳胶图、分光光度或Nanodrop仪器检测数据等。
注：为保证后续建库的质量，不建议客户直接送自己反转录的cDNA进行实验。
表2.RNA送样标准一览表
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