具中科博生研究表明，成年脑组织中神经干细胞（neuralstemcell,NSC)的精确定位日前低有有争议，据报道有3个部位NSC的含量最高，通常作为细胞的来源，亚助侧脑室和嗅球之间的连接部位及海马。
通过检测单细胞悬液表达各种细监主志的情况及在荧光激活的细胞筛选（fluorescenceactivatedcllsortingFAC、由表现出来的特征，可以初步鉴定可能的NSC。NSC在筛选出的不同亚群中的频率通过单个细胞形成多潜能神经球的能力决定。对NSC目前仍没有固定的分离方法，下面仅介绍几种从成年小鼠脑组织中分离NSC的方法。中科博生。
方法1（Rietzeetal.)
单细胞悬液的制备：取8～10周龄成年小鼠,断颈处死,切下脑室周围组织放于含有HEPES的Eagles培养液中（HEPES-bufferedEaglesmedium,HEM)。
然后将组织切成小块转移到无Ca*/Mg的HBSS（含有10mmol/LHEPES,pH7.6;mg/mlEDTA;0.5mmol/L胰蛋白酶；0.%DNase)中，37℃放置20min。加入6ml含5%胎牛血清的HEM,g离心7min。弃上清，沉淀用ulPBS（pH7.4）重悬并捣碎，通过一个70um的滤网除去碎片后即获得单细胞悬液。中科博生。
NSC富集的第一步是根据细胞的大小，大约80%具有NSC活力的细胞直径都12um。
NSC富集的第二步是根据与花生凝集素（peanutagglutinin,PNA)结合力的强弱,这一方法以前曾被用于对小鼠造血干细胞进行分类。根据FACS行为,将细胞分为3群：PNA,PNA和PNAm。其中直径12umPNA群中细胞数占细胞总数的1.73%±0.75%,NSC活力最高,大约7个细胞中就有1个可以形成神经球。虽然在PNA群中可以检测到多种表面抗原,如CD30、CD34和CD90.2,但只有热稳定抗原（heat-stableantigen,HSA,mCD24a）与PNA群中的NSC密切相关。PNAHSA亚群占细胞总数的0.27%士0.07%,几乎全部具有NSC活性。在克隆培养条件下,每孔接种一个PNAHSA细胞,大约80%(1:1.28)的细胞可以形成神经球。而且,PNAHSANSC占了全部NSC的63.2%,说明脑室周围区中绝大多数的NSC都是这个表型。中科博生。
进一步检测发现，PNAHSANSC全部表达巢蛋白（nestin)(一个公认的
NSC标志),而不表达其他分化细胞的标志，如Ⅲ型β微管蛋白、O4或GFPA。
虽然PNAHSANSC不表达室管膜标志HSA,但是室管膜中的PNAHSA细胞包含了绝大多数的NSC活力。最简单的解释就是在亚脑室区和室管膜区存在着一群共同的NSC。
总之，根据以上资料，位于亚脑室区和室管膜区的大多数NSC都具有PNAHSAnestin的表型，可以据此对其进行分离。中科博生。
方法2
断颈处死小鼠，在脑皮质到侧脑室之间划一个切口，取出的组织包括完整的尾状核、壳核及苍白球的侧面部分，特别注意不要切去胖胝体上的组织。
用胰蛋白酶消化组织使其成为单细胞悬液后，以低密度（个细胞/cm)铺板，培养基为含有20ng/ml表皮生长因子（epidermalgrowthfactor,EGF）或碱性成纤维细胞生长因子（basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)的DMEM/F12混合培养基。中科博生。
在EGF和bFGF存在的条件下，有1%的细胞存活下来，存活下来的细胞，形态肥大，并开始分裂，直到形成球状体脱离基质。分别添加EGF和bFGF的两组，孔板中球状体形成的数量没有明显差异。中科博生。
为了对bFGF刺激形成的原代神经球进行鉴定，体外培养21d的单个神经我打散后被转移到多聚L-鸟氨酸（poly-L-ornithine,polyo）包被的载玻片上，1、2h后进行免疫细胞化学检测。没有任何细胞表达GFAP(星形胶质细胞的特泉性标志）、神经元抗原NSE和MAP-2或者GalC(小胶质细胞的特异性标志)而所有的细胞都表达神经上皮细胞抗原——巢蛋白。由此得出，bFGF可以诱导成年小鼠前脑中未分化的祖细胞进行增殖。
中科博生期待大家一起探讨学习。