和大家一起学习肺癌的免疫环境的研究要如何设计以及开展，今天分享的文章是发表于《CellReports》标题为《NeutrophilsandSnailOrchestratetheEstablishmentofaPro-tumorMicroenvironmentinLungCancer》。
作者使用了Kras（G12D）驱动的肺癌小鼠模型来建立免疫特征，并确定了Gr1+中性粒细胞对疾病进展的贡献。耗尽实验表明，Gr1+细胞（1）促进肿瘤生长，（2）减少T细胞归巢并阻止成功的抗PD1免疫疗法，以及（3）改变血管生成，导致缺氧和Snail在肺癌细胞中持续表达。反过来，Snail加快了疾病的进程并增加了肿瘤内Cxcl2分泌和中性粒细胞浸润。Cxcl2主要由嗜中性粒细胞自身产生，以响应表达Snail的肿瘤细胞分泌的因子。因此，作者提出了涵盖嗜中性粒细胞和Snail的恶性循环，以维持有害的肿瘤微环境。
KP肿瘤中的动态免疫反应
在KP小鼠中，适应性免疫控制疾病的进展。作者通过在Rag1缺陷小鼠与KP小鼠杂交获得的KP-Ragko肿瘤小鼠与正常KP肿瘤相比肿瘤增长速度增加。通过IF观察免疫细胞的定位，进而研究KP小鼠肿瘤的免疫微环境。结果显示免疫细胞在肿瘤组织外大量聚集，包括T细胞（CD4+和CD8+）、B细胞（B+）、巨噬细胞（F4/80+）及Gr1（Ly6G-C）阳性细胞（图1A）。作者通过流式对KP肿瘤的免疫细胞进行了进一步分析，显示髓样细胞占优势（51％±10％），淋巴样细胞占37％±12％（图1B-D）。
图1
KP小鼠的肺切片组织病理学分析说明病变的异质性，良性病变和晚期病变在同一动物中发现，晚期组织学分级(腺癌4级和5级)主要在最大的肿瘤组织中发现（图S2A-B）。因此作者进一步研究了识别与肿瘤进展和病灶间异质性相关的免疫特征变化。
在正常的KP肿瘤中，基于48个免疫细胞群的丰度，根据肿瘤的重量对肿瘤进行分类分为small[S]、Mix1和Mix2。作者接下来为了从复杂的细胞计数数据中识别细胞群，开发了MegaClust（