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TUhjnbcbe - 2025/1/25 22:15:00

细胞转染

细胞转染方法对比,以及各类方法的优缺点,我们都已介绍过了。

今天来到细胞转染——技巧篇,谈谈如何才能进行高效地转染。

NO.1

转染试剂的选择

不同细胞系转染效率通常不同,但细胞系的选择通常是根据实验的需要,因此在转染实验前应根据实验要求和细胞特性选择适合的转染试剂。

每种转染试剂都会提供一些已经成功转染的细胞株列表和文献,通过这些资料可选择最适合实验设计的转染试剂。当然,最适合的是高效、低毒、方便、廉价的转染试剂。

NO.2

细胞状态

一般低的细胞代数(50)能确保基因型不变。最适合转染的细胞是经过几次传代后达到指数生长期的细胞,细胞生长旺盛,最容易转染。

细胞培养在实验室中保存数月和数年后会经历突变,总染色体重组或基因调控变化等而演化。这会导致和转染相关的细胞行为的变化。也就是说同一种系的细胞株,在各实验室不同培养条件下,其生物学性状发生不同程度的改变,导致其转染特性也发生变化。

因此,如果发现转染效率降低,可以试着转染新鲜培养的细胞以恢复最佳结果。

NO.3

转染方法

转染时应根据具体转染试剂推荐的方法进行,但也要根据实验室的条件来确定最佳转染条件。

(1)细胞培养物

推荐在转染前24小时分细胞,这将提供正常细胞代谢,增加对外源DNA摄入的可能。一定要避免细菌,支原体或真菌的污染。

(2)细胞密度

细胞密度对转染效率有一定的影响。如果选用新的细胞系或者新的转染试剂,最好能够进行优化实验并为以后的实验建立一个稳定方法,包括适当的接种量和培养时间等等。

(3)血清

对于主流的转染试剂来说,血清的存在不会影响转染效率,甚至还有助于提高转染效率。

不过要特别注意:对于RNA转染,如何消除血清中潜在的RNase污染是值得

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