巨噬细胞属免疫细胞,是研究细胞吞噬、细胞免疫和分子免疫学的重要对象,RAW.7(小鼠单核巨噬细胞白血病细胞)就是科学实验中常用到的细胞系,其来源为雄性Abelson鼠科白血病病毒诱导的肿瘤。RAW.7培养有许多注意事项,在培养过程中容易出现细胞形态改变(长出伪足)、消化困难、生长缓慢等问题。由于细胞的生长状态对实验数据是存在较大影响的,所以今天就来和大家分享一下RAW.7细胞培养的经验。
一、细胞的形态与特点
RAW.7细胞一般为圆形或椭圆形,小而透亮。因为其具有较强的吞噬能力,并在吞噬抗原后释放趋化因子,促使细胞分化出伪足,粘附攀爬能力也因此增强。若细胞吞噬抗原过多、培养环境恶劣就会促使细胞呈现出梭形、长梭形,镜下观察就会发现细胞形态变为梭形且面积变大,不再是具有细长伪足的类圆形小细胞。这也是出现消化困难的一个主要原因。
二、培养注意事项
1、由于RAW.7细胞易有不同形态,传代时就会发现形态变为梭形的细胞很难消化下来,轻敲培养皿细胞不会脱落,用力吹打又容易对细胞产生较大损伤,因此要尽量避免细胞发生形态改变。即在接种细胞时保持一个适中的传代密度,避免其向终末细胞分化,因为一旦细胞发生分化变为长形是无法恢复的,这是培养RAW.7细胞时最需要注意的问题。
2、RAW.7细胞喜欢连片生长,正常状态下应该是一小片一小片的分布在培养皿中,片片之间不相连接,等到长到更多更密的时才会连成大片,但同时也会叠加成层,容易出现部分细胞飘起无法贴壁的问题。所以,要