无菌是组织培养实验室不同于其他大多数实验室的主要要求。一般来说,无菌条件并不是设要花很多钱去创造一个很大的无菌区城,重要的是组织培养实验室能够防尘和不设立通道。组织培养室如何布局和陈设?使用生物安全柜是创造无菌条件的简便方法,若位置合适,还可将非专业实验室内的空间利用起来。布局取决于工作方式、规模和使用人数(图1~图4)。
图1小型组织培养室。适于2-3人使用的简易的组织培养实验室布局情况。深色区代表可移动的设备;浅色区代表固定的或可移动的器具。1ft=0.m。比例尺1:
图2中型组织培养室。适于5-6人的带洗涮和准备室的组织培养实验室布置情况。深色区代表可移动仪器设备;浅色区代表固定的或可移动的器具。1ft=0.m。比例尺1:
图3带有相邻准备室的组织培养室。中型组织培养实验室,但带有准备区、显微镜室和37℃温室。1ft=0.m。比例尺1:
图4大型组织培养室。容纳20-30人。具有相邻的洗涤-灭菌-准备区。深色区代表可移动仪器设备;浅色区代表固定的或可移动的器具。1ft=0.m。比例尺1:
但实验室布要遵循一般原则。各房间设计得要方便清洁,最好在墙体与天花板之间或者墙体与地板之间有一圆形拱,避免难以清理的缝隙存在。设备应稳固放置在地板上,设备基底部要留有一个弧形拱弯;或者牢固吊在操作台上,操作台下面要留有一的空间以便于清洗。地板上要覆盖一层乙烯基丙烯酸涂料或其他防尘材料,在铺设时要有一定地度,并略向远离消毒柜的门外侧的地漏倾斜。这种设计便于必要时用水冲洗地板,更重要的是能防止蒸馏器、高压蒸汽灭菌锅或水槽的水溢到地板上时对仪器设备造成损坏。
一般来说,设备的放置应该遵循如下原则:
产生制造小股气流或灰尘的设备应该放置在尽可能远离无菌工作区的位置。因此,压缩机能产生气流的冰箱、冷藏柜等设备要远离生物安全柜,而细胞计数板和显微镜要放置在离生物安全柜较近的位置,这也是目前普遍使用的布局方式。
如果一个细胞培养室在使用时封闭、无冷却,那么冰箱可以放在靠近生物安全柜的地方
如果所有相关活动必须在同一个房间内完成(如图1,小型组织培养实验室),那么洗涤区、装瓶区和消毒区应该设在房间的另一端,远离生物安全柜的地方;从外面带进来的物品,如钢瓶、液氮罐应放在门口附近,即远离生物安全柜的另外一头。
很有必要建立一个带有相邻准备区的专用组织培养实验室或带有一个公共准备区的多个规模稍小的专用组织培养实验室,这样就不必在只有一个生物安全柜的常规实验室进行组织培养,隔离设施能提供更好的防范保护作用,能将组织培养物与常规实验室中的试剂、玻璃器皿分隔3来,如果涉及人或其他灵长类细胞的培养,则必须采取防范措施。
若有可能,最好将准备区、洗涮区和无菌区与组织培养实验室分隔开,但要彼此相邻。若你有一个带有单独洗涤和消毒区域的大型实验室,将组织培养室安排在同一层、靠近洁净室的位置,二者之间无台阶阻碍,这样就很方便手推车和小车的使用。最理想的是中间横穿一个走廊。因此需合理安排布局以尽可能降低冲突,使组织培养室离储藏室近一些,方便物品的取放,同时设置一个方便的通道在不干扰消毒工作的同时补充库存,另外还要方便移除被污染的物品。
如果考虑对现有设施进行改造,很明显会有结构上的局限性;要慎重选择实验室位置,避免空间紧张,同时避免笨重的物体进入房间而导致操作灵活性及空气流动受限。
组织培养室需要哪些必备条件?
不论规模大小,一个组织培养室必须提供以下设备或条件:
(1)无菌操作区(生物安全柜)。
(2)手推车,为无菌操作区提供服务。
(3)真空泵和储罐,用于抽吸和丢弃细胞培养废液。
(4)防范措施(潜在的生物危害性,隔离)。
(5)潜在生物危险的废物处理(液体、塑料制品、尖锐物品)。
(6)常规废物的处理(塑料包装、纸巾、药签、棉纸)。
(7)洗手(实验室出口处的水槽)。
(8)培养(密封的培养瓶、带气孔的培养瓶、培养皿、培养板)。
(9)大规模培养(生物反应器、滚瓶)。
(10)提供CO2(需要纯的CO2,与空气混合后向培养物提供气体)。
(11)细胞计数。
(12)离心。
(13)洗涤(玻璃器皿、仪器)。
(14)水纯化(去离子水或反渗水用于漂洗工作,超纯化水用于试剂和培养基的制备)。
(15)准备(液体的制备和装瓶,包装塑料物品的准备)。
(16)消毒(干热、蒸汽和过滤消毒)。
(17)室温下无菌存(如塑料物品、玻璃器皿、手套、水和盐溶液的存放),4℃保存(如工作液和10x浓缩培养基),-20℃保存(血清、谷氨酰胺、抗生素),-℃保存(深冷冰箱储存--安瓿瓶被撑在杆上或置于分段式抽屉里)。
(18)液氮储存(支持用液氮深冷低温箱储存)。
(19)倒置显微镜[用于监测培养物,需要用于绿色荧光蛋白(GFP)等报道基因检测的荧光]。
(20)高倍荧光显微镜(用于DNA染色法支原体检测、免疫荧光检测;无须在消毒区)。