小伙伴们，咱们做细胞实验一般首先想到的就是增殖和周期。细胞增殖与周期是评估细胞代谢、生理病理功能的一个非常重要的功能参数，是测定物质*性、评估药物安全评价、细胞健康的基本方法。酸菜近期特地对细胞周期及细胞增殖的检测方法做了些汇总，拿出来给大家分享一下，希望对小伙伴们有帮助。（以下是一些方法介绍，具体步骤请回复关键字“cell”查看！）
--by酸菜
细胞周期及细胞增殖常见的检测方法包括：细胞计数法，BrdU渗入法，MTT法，流式细胞仪测定法等。
细胞计数法：
体外培养细胞生长、分裂增殖的能力，可以用分裂指数来表示。分裂指数指细胞群体中分裂细胞所占的百分比。该方法需要对不同时间点的细胞分别固定，然后在光镜下计数。此法的不足之处在于无法区分增殖细胞与非增殖细胞。但是可应用此基础绘制细胞生长曲线。
BrdU渗入法：
BrdU（5-溴脱氧尿嘧啶核苷）加入培养基后，可做为细胞DNA复制的原料，BrdU可代替胸腺嘧啶核苷插入复制的DNA双链中，而且这种置换可以稳定存在，并带到子代细胞中。此法比较常用，用于区分正在增殖的细胞与静止期细胞。
MTT法：
外源性MTT（四唑盐）可被活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶还原成难溶的蓝紫色结晶物并沉淀在细胞中，而死细胞无此功能，DMSO（二甲基亚砜）能溶解细胞中的紫色结晶物，用酶联检测仪在nm波长处检测其光密度值，可间接反映活细胞数量。此法相较于BrdU方法更加直观，操作简单。
流式细胞术的出现为细胞周期分析提供了一个崭新的平台。接下来，酸菜为大家详细介绍一下流式细胞术测定细胞周期的方法。该方法是基于对细胞内DNA以化学定量方式的染色（染料着色数量直接与细胞内DNA含量相关）。染料与抗体的联合使用不仅能够反映细胞周期与增殖的情况，而且可以区分凋亡的细胞。在实验数据的呈现上，也显得技术上的“高大上”。
流式细胞仪测定法：
介绍两个能够区分细胞周期的方法
一、BrdU/PI(溴脱氧尿苷/碘化丙啶)法
BrdU（DNA前体胸腺嘧啶的类似物）掺入到新合成的进入S期（DNA合成期）细胞DNA中。用于检测BrdU的抗体只识别DNA单链中的BrdU，对于未变性的双链DNA可用PI染色。持续的BrdU的掺入可以用于确定和分析处于DNA合成活跃状态的细胞，区分于那些处于静止期的细胞，从而进行细胞增殖比例的分析；另一方面，不同时间点加入BrdU，可以分析细胞周期动力学。
二、Cyclins/PI(细胞周期蛋白/碘化丙啶)法
在细胞周期的不同阶段对应着不同的细胞周期蛋白。一般上，cyclinD1在G1期早期，cyclinE在G1/S转变过程中达到顶峰，cyclinA在G2/M期出现，cyclinB1在G2/M晚期出现。同上，用PI染色显示DNA含量。但是，酸菜提醒各位小伙伴们一点，有个别细胞其cyclins的表达特征并非如此。
酸菜推荐：
1、想要绘制细胞和比较不同细胞的生长曲线，推荐采用细胞计数法。
2、只监测细胞增殖活性，可采用Brdu法、MTT法及BrdU/PI法。
3、区分G1/S期，G2/M期可采用Cyclins/PI法。
4、细胞周期与凋亡同时检测可采用TUNEL/PI染色和F-Actin/PI染色。
（敬请期待近期细胞凋亡专项内容！）
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