一、协商后台
癌症是一种动态疾病。从非恶性细胞最后动弹成恶性细胞，进展中的肿瘤不休进展，而且在疾病流程中常常变得加倍异质。肿瘤异质性不但包含肿瘤细胞之间的基因组异质性，还包含肿瘤微处境(TME)的非癌区室的异质性，包含免疫细胞、间充质细胞和内皮细胞(EC)以及非细胞成份。这类繁杂处境中的交换是经过直接的细胞与细胞来往以及经过渗出因子来实行的。此中，细胞外囊泡(EV)，如外泌体，正在成为要害的TME细胞间通信介质。
细胞外囊泡由TME中存在的大多半（倘使不是一块）细胞典型渗出。EV的含量取决于临盆细胞的典型和生理状况，包含非编码小RNA、mRNA、卵白质和脂质。EV已依据其亚细胞滥觞实行分类。直接从细胞质膜产生和释放的EV被称为微粒、微泡或外泌体，并显示出各式尺寸（直径-0nm）。当这些隔室与质膜合并时，在多泡内体隔室中产生的内部囊泡被渗出到细胞外处境中：这些EV被称为外泌体。外泌体也由它们的巨细（50-nm）和它们的内体干系卵白含量来界说。在这项处事中，咱们将哄骗通用术语“EV”来指代表白特定外泌体标识的袖珍EV。
内皮细胞渗出的细胞外囊泡是内皮功用的要害参加者，并有助于血管生成干系疾病，如血汗管疾病和癌症。很多癌症协商都强调了各式癌症典型中肿瘤细胞渗出的EV的促血管生成个性。在肿瘤处境中，已视察到肿瘤细胞和EC之间经过EV实行的物资替换。相悖，ECs也能够从其处境中存在的其余细胞典型领受调动其表型的EV。比如，已发掘间充质干细胞(MSCs)可渗出EV，进而在体外和体内增进血管生成。
到当前为止，大多半协商都与仅波及两种细胞典型的EV通信干系。在这项处事中，咱们汇报了肿瘤败露的EC释放的EV参加了巨噬细胞向肿瘤的召募，进而致使了容许肿瘤成长的免疫调动表型。
二、协商完毕
Result1TME调动内皮表型
为了肯定TME对EC做为的影响，咱们试图肯定败露于肿瘤细胞时EC中改动的关键道路。为此，咱们哄骗了一种共教育系统，此中人脐静脉内皮细胞(HUVEC)与人三阴性乳腺癌细胞(MDA-MB-)一同教育。48小时后，哄骗涂有CD31抗体的磁珠纯化单教育或共教育的HUVEC（图1a），这是一种由HUVEC遍及表白的内皮标识物（流式细胞术98%），但在MDA-MB-中险些探测不到（图1b）。正如预期的那样，经过卵白质痕迹（图1c）和RT-qPCR解析，分散的细胞显示出CD31的富集和乳腺癌标识物EpCAM的缺失。
GSEA显示了一些肿瘤干系通路在共HUVEC中遭到影响（图1d）。独特是，富集了几个炎症干系基因组，包含侵犯素-α和-γ反响，TNF-α记号传导和炎症反响（图1e）。这些通路的上调讲明ECs曾经改动了它们的炎病症态，本相上，一些细胞粘附基因在co-HUVECs中被上调（图1f）。
整体而言，这些完毕讲明与肿瘤细胞共教育改动了EC转录组并经过炎症记号通路向导激活。
Result2TME调动内皮EVs的含量
在视察到肿瘤细胞向导EC激活后，咱们假使肿瘤处境也会影响EC衍生EV的物品构成。因而，咱们试图肯定存在或不败露于癌细胞的EC释放的EV中存在的RNA的全部构成部份。为此，咱们从单HUVEC和共HUVEC中采集教育上清液，经过超速离心分散EV，并哄骗抗CD31磁珠经过亲和拿获特意检索内皮EV（图2a）。
经过冷冻透射电子显微镜对分散的囊泡的解析显示了球形形状（图2b）。哄骗动态光散射，咱们发掘它们的均匀尺寸为nm(±19.1nm)，常常以为是外泌体的尺寸界限（图2c）。这些囊泡还富含四种典范的外泌体标识物，CD81、CD9、CD63和syntenin。正如预期的那样，咱们没有探测到线粒体细胞色素C（图2d)，讲明这些囊泡制剂富含外泌体。正如咱们对细胞所做的那样，咱们经过评价内皮标识CD31和乳腺癌标识EpCAM的程度来审查咱们的内皮EV制剂的纯度。要害的是，CD31的富集和EpCAM的缺失讲明咱们的EV制剂含有不受来自肿瘤细胞的EV浑浊的内皮EV（图2e）。尔后，咱们从简单教育衍生的HUVECEVs(mono-EVs)和共教育衍生的HUVECEVs(co-EVs)中分散出总RNA。
近来的处事强调了miRNA在EV的RNA功用中的效用。当前尚不知道其余RNA物种在EV生物学中的效用程度。因而，咱们决意