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TUhjnbcbe - 2023/2/9 8:52:00

具中科博生研究表明,黏附细胞与悬浮细胞相比更难以大规模培养,因为需要提供大量的黏附额外表面,在尽可能利用空间的同时还要保持整个系统的匀质性。悬浮培养容量为1L的撞拌式容器与容量为L的容器相比各种参数极为类似,因此,悬浮培养常常是优先选择的方案。中科博生。

细胞扩大培养的第一步多是从静止的培养瓶(表面积可达cm2)到转瓶(表面积可达cm2)。大摇瓶的细胞产量可达(2X)(5X)个细胞,在大多数情况下,利用多个转瓶培养细胞就可满足需要。扩大培养的下—步是使用表面积较大的转瓶,可由其内包含许多玻璃管或塑料螺旋膜层的转机达到这一目的.通过这种方法转瓶的表面积可增加到cm2和cm2。中科博生。

一种旋转式的细胞培养设备是利用多层塑料盘来类增加细胞培养面积,每层托盘的表面积为cm2,每个培养瓶中最多可放宣40个托盘(总表面积可达30cm2)。目前有两种系统均适合大规模的贴壁细胞培养,这两种系统细胞黏附的底物分别是固定的柱床(由球形玻璃构成)和微载体(细胞黏附在Mm的圆球状基质上,用悬浮式细胞培养设备搅拌培养)。微载体可提供OOOcm2/L细胞附着面积,目前商品化的培养系统容积可达L,总表面积达1.5Xcm2,最多可支持1.5X个细胞附着生长。中科博生。

常用可多次使用的玻璃和塑料为材料的滚动培养瓶。最常使用的是大小分别为cm2和~cm2表面积两种。完全的标准组件系统最多可容纳48个大培养瓶。

下面以cm2面积为例说明滚动摇瓶的培养过程:

①加入300ml培养基;

②接种1.5X细胞量,

③以15r/min的转速旋转滚瓶;

④用倒置显微镜长期观察细胞的生长状况;

⑤细胞生长35d后,细胞汇合成片,细胞量大约为1.5X个/cm2(人二倍体细胞)或5X个/cm2(异倍体细胞如HeLa细胞);

⑥吸出培养基,用预热的磷酸盐缓冲液清洗贴壁细胞,加入20ml胰酶(0.25%)。将培养瓶放回到滚动设备中,旋转min,细胞将会从瓶壁脱落,收集细胞,加入新鲜的培养基和血清,根据情况进行传代培养。中科博生。

以上列出的操作过程可根据各种具体情况的不同而有所变动。这种方法的优点是培养基的体积和表面积的比例可以很容易地改变。如细胞经过生长期后,细胞表达的产品将要收集的时候,此时将细胞的培养基的体积减为ml可大大提高表达产品的浓度。

中科博生期待大家一起探讨学习。

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