1、从37℃培养16-20h的平板中挑取一个单菌落，转到一个含有mLLB培养基地1L烧瓶中。于37℃剧烈振摇培养3h。一般经验，OD约有大肠杆菌10^9个/mL。
2、将细菌转移到一个无菌、一次性使用的、用冰预冷的50mL聚丙烯管中，在冰上放置10min，使培养物冷却至0℃。
3、于4℃，4rpm离心10min，回收细胞。
4、倒出培养液，将管倒置1min以使最后的痕量培养液流尽。
5、每50mL初始培养物用30mL冰预冷的0.1mol/LCaCl2-MgCl2溶液（80mMMgCl2，20mMCaCl2）重悬每份细胞沉淀。
6、于4℃，4rpm离心10min，回收细胞。
7、倒出培养液，将管倒置1min以使最后的痕量培养液流尽。
8、每50mL初始培养物用2mL冰预冷的0.1mol/LCaCl2溶液重悬每份细胞沉淀。
9、此时，将制备的感受态细胞直接做转化实验，也可以将细胞存80℃备用。
注：整个过程需无菌操作。
（1）1mol/LCaCl2配制
称取1.11g无水CaCl2，溶于10mL去离子水中，混合后使之完全溶解，用0.22μm滤器过滤除菌。
（2）Cacl2-MgCl2（80mmol/lMgCl2，20mmo/lCacl2)溶液配制：
储存液配制：
5MCaCl2配制：CaCl.75g→50mLH2O，37℃孵箱中放置过夜使之完全溶解，用0.22μm滤器过滤除菌；#细胞#
2MMgCl2配制：MgCl29.52g→50mLH2O，用0.22μm滤器过滤除菌。
工作液配制：
0.1MCaCl2-MgCl2mL：
5MCaCluL+2MMgCl24mL+H2O95.6mL
感受态细胞图